| 目录 | 第1-5页 |
| 英文缩写词表 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 材料与方法 | 第15-26页 |
| 1.材料 | 第15-17页 |
| ·引物合成及序列测定 | 第15页 |
| ·菌株和细胞株 | 第15页 |
| ·质粒 | 第15页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第15页 |
| ·常用试剂盒 | 第15-16页 |
| ·其它分子生物学试剂和化学试剂 | 第16页 |
| ·细胞培养试剂 | 第16页 |
| ·抗体 | 第16页 |
| ·主要实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.方法 | 第17-26页 |
| ·重组质粒构建与鉴定 | 第17-20页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第18页 |
| ·酶切聚合酶链式反应产物和相应的真核以及原核的蛋白表达载体 | 第18-19页 |
| ·酶切聚合酶链式反应产物和相应的真核以及原核的蛋白表达载体后将它们连接起来 | 第19页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞,将重组质粒转化进入感受态细菌 | 第19页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞,将重组质粒转化进入感受态细菌后重组子的筛选 | 第19-20页 |
| ·DNA片段的序列测定 | 第20页 |
| ·转染 | 第20页 |
| ·IP | 第20页 |
| ·Western blot分析 | 第20-21页 |
| ·luciferase测定 | 第21页 |
| ·转录激活活性检测 | 第21页 |
| ·luciferase的转染方法 | 第21页 |
| ·siRNAs的表达载体的构建 | 第21-22页 |
| ·MTT绘制细胞生长曲线 | 第22-23页 |
| ·哺乳动物细胞混合克隆的制备 | 第23页 |
| ·肿瘤细胞的软琼脂成集落实验 | 第23页 |
| ·核质分离实验 | 第23页 |
| ·组织免疫染色 | 第23-24页 |
| ·细胞间接免疫荧光染色 | 第24页 |
| ·哺乳动物细胞周期测定 | 第24-26页 |
| 结果 | 第26-56页 |
| 第一部分 CCP22抗体的制备与鉴定 | 第26-30页 |
| ·CCP22抗体的制备 | 第26页 |
| ·CCP22抗体的鉴定 | 第26-28页 |
| ·针对CCP22的siRNA能够降低CCP22内源片段的表达水平 | 第28-29页 |
| 小结 | 第29-30页 |
| 第二部分 CCP22在细胞株和组织中的表达及其亚细胞定位 | 第30-38页 |
| ·CCP22在细胞系中的表达鉴定 | 第30页 |
| ·CCP22在多种小鼠组织中都有表达 | 第30-31页 |
| ·CCP22-C能够被分泌到细胞外而CCP22-N则不能 | 第31-32页 |
| ·使用间接免疫荧光方法检测CCP22的亚细胞定位 | 第32-33页 |
| ·使用细胞核质分离方法检测CCP22的分布 | 第33-34页 |
| ·CCP22-N的亚细胞定位受到TGFβ调控 | 第34-36页 |
| ·CCP22在人乳腺癌和肝癌组织中的表达鉴定 | 第36-37页 |
| 小结 | 第37-38页 |
| 第三部分 CCP22与Smads蛋白的相互作用 | 第38-41页 |
| ·CCP22能够和Smad2/3/4相互作用 | 第38-39页 |
| ·CCP22能够和Smad4的MH2结构域相互作用 | 第39-40页 |
| 小结 | 第40-41页 |
| 第四部分 CCP22对TGFβ/Smads介导的转录活性的影响 | 第41-51页 |
| ·利用小干扰RNA(siRNA)降低CCP22表达对TGFβ/Smads介导的转录活性的影响 | 第41-46页 |
| ·CCP22对TGFβ/Smads介导的转录活性的调节作用依赖于Smad4 | 第46-48页 |
| ·TGFβ对CCP22 siRNA作用的剂量效应 | 第48-49页 |
| ·使用CCP22 siRNA降低CCP22的表达能升高TGFβ/Smads下游基因p15和p21的表达 | 第49-50页 |
| 小结 | 第50-51页 |
| 第五部分 CCP22对肿瘤细胞生长的调节作用 | 第51-56页 |
| ·使用CCP22 siRNA降低CCP22的表达能够降低多种肿瘤细胞的生长速度 | 第51-52页 |
| ·CCP22 siRNA能够抑制多种肿瘤细胞的锚定非依赖性生长 | 第52-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 结论总结 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 研究展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 文献综述 | 第64-72页 |
| 论文 | 第72-80页 |
| 个人简历 | 第80-81页 |
| 在读期间发表文章 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
