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人IL-1R Ⅰ胞外区毕赤酵母表达载体的构建和表达

中文摘要第1-5页
Abstract第5-9页
引言第9-13页
 1 IL-1RI的结构第9页
 2 IL-1RI的表达第9-10页
 3 IL-1RI信号转导过程第10-11页
 4 IL-1RI与疾病的关系第11-12页
 5 IL-1RI的研究意义第12-13页
第一部分 人IL-1R Ⅰ胞外区基因克隆及其PPICZAA-SIL1R Ⅰ表达载体的构建第13-24页
 1 实验材料第13-14页
   ·菌株、质粒细胞、实验试剂第13-14页
   ·主要的仪器设备第14页
 2 实验方法第14-19页
   ·制备人白细胞RNA第14-15页
   ·RT-PCR扩增cDNA第15页
   ·PCR扩增IL-1R Ⅰ胞外区DNA序列第15-16页
   ·构建pPICZ α A-sILlR Ⅰ重组质粒第16-19页
   ·DNA序列的测定第19页
 3 实验结果第19-22页
   ·Trizol法提取白细胞总RNA第19-20页
   ·IL-1R Ⅰ编码区胞外片段经PCR扩增结果第20页
   ·质粒pPICZ α A电泳结果第20-21页
   ·pPICZ a A-sIL1R Ⅰ表达载体的构建第21-22页
 4 讨论第22-24页
第二部分 PPICZ A A-SIL1R Ⅰ在毕赤酵母的表达第24-33页
 1 实验材料第24页
   ·菌株、实验试剂第24页
   ·主要实验仪器第24页
 2 实验方法第24-28页
   ·重组质粒pPICZ α A-sIL1R Ⅰ的大量提取(QIAquick质粒提取Kit)第24-25页
   ·线性化重组质粒第25页
   ·线性化的重组质粒电转化入酵母菌第25-26页
   ·PCR鉴定转化子第26页
   ·转化子表型的筛选第26-27页
   ·表达菌株的诱导表达第27页
   ·GS115裂解第27页
   ·表达产物的Western-Blot分析第27-28页
 3 实验结果第28-30页
   ·转化子PCR鉴定第28-29页
   ·转化子表型(Mut~+或Mut~s)筛选的PCR鉴定第29页
   ·表达产物IL-1R Ⅰ胞外区蛋白的western-blot结果第29-30页
 4 讨论第30-33页
结语第33-34页
综述第34-44页
参考文献第44-51页
附录第51-54页
在校期间发表论文第54-55页
致谢第55页

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