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FISH-FCM在蛭弧菌裂解宿主速率检测中的应用

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
第一章 引言第12-22页
   ·蛭弧菌的简介第12-14页
     ·蛭弧菌的分类第12页
     ·蛭弧菌的生物学特性第12-13页
     ·蛭弧菌基因组的研究第13-14页
   ·蛭弧菌研究进展第14-18页
     ·蛭弧菌生长条件与发酵条件的研究第14页
     ·蛭弧菌用于农业生产的研究第14-17页
       ·蛭弧菌用于水产养殖致病菌的清除第14-15页
       ·蛭弧菌用于水质改善的研究第15页
       ·蛭弧菌用于改善水产养殖动物免疫力的研究第15-16页
       ·蛭弧菌用于防治兽禽疾病的研究第16-17页
     ·现代分子生物学方法用于蛭弧菌研究的进展第17-18页
       ·实时荧光定量PCR (Real-time PCR)第17页
       ·变性温度梯度凝胶电泳(DGGE)第17-18页
       ·DNA 扩增片段限制性内切酶分析(ARDRA)第18页
       ·蛭弧菌的基因研究方法第18页
   ·荧光原位杂交(FISH)第18-19页
   ·流式细胞仪检测技术第19-21页
   ·立题依据和意义第21-22页
第二章 蛭弧菌的分离、纯化及鉴定第22-34页
   ·引言第22页
   ·材料与仪器第22-24页
     ·实验材料第22页
     ·试剂第22-23页
     ·培养基第23页
     ·溶液第23-24页
     ·仪器和设备第24页
   ·实验方法第24-27页
     ·宿主菌的培养第24-25页
     ·样品预处理第25页
     ·蛭弧菌的分离第25页
     ·蛭弧菌的纯化第25-26页
     ·蛭弧菌的电镜观测鉴定第26页
       ·蛭弧菌悬浮液的制备第26页
       ·透射电子显微镜观测样品的制备第26页
     ·蛭弧菌的分子生物学鉴定第26-27页
       ·基因组提取第26-27页
       ·PCR 引物第27页
       ·PCR 反应体系第27页
   ·结果与分析第27-32页
     ·蛭弧菌分离、纯化结果与分析第27-29页
     ·蛭弧菌透射电镜观察结果与分析第29-30页
     ·蛭弧菌 16s rDNA 鉴定结果与分析第30-32页
   ·本章小结第32-34页
第三章 宿主荧光原位杂交条件优化第34-45页
   ·引言第34页
   ·材料和与仪器第34-37页
     ·材料第34-35页
     ·试剂第35页
     ·培养基第35-36页
     ·溶液第36页
     ·仪器和设备第36-37页
   ·实验方法第37-40页
     ·玻片处理第37页
     ·蛭弧菌对SD6 的裂解情况第37页
     ·SD6 的培养与固定第37-38页
     ·PI 染色第38页
     ·透化对杂交的影响第38-39页
       ·Triton X-100 透化对SD6 杂交的影响第38页
       ·蛋白酶K 处理对SD6 杂交的影响第38-39页
     ·探针浓度对SD6 杂交的影响第39页
     ·杂交时间浓度对SD6 杂交的影响第39页
     ·杂交温度浓度对SD6 杂交的影响第39-40页
   ·结果与分析第40-44页
     ·蛭弧菌对SD6 的裂解情况第40页
     ·玻片处理第40-41页
     ·PI 染色结果第41-42页
     ·Triton X-100 透化结果第42页
     ·蛋白酶 K 透化结果第42-43页
     ·探针浓度对SD6 杂交的影响第43页
     ·杂交温度对SD6 杂交的影响第43-44页
     ·杂交时间对SD6 杂交的影响第44页
   ·本章小结第44-45页
第四章 蛭弧菌荧光原位杂交条件优化第45-54页
   ·引言第45页
   ·材料和与仪器第45-47页
     ·材料第45页
     ·试剂第45-46页
     ·培养基第46页
     ·溶液第46-47页
     ·仪器和设备第47页
   ·实验方法第47-49页
     ·离心对蛭弧菌和宿主分离情况的影响第47页
     ·蛭弧菌培养与固定第47-48页
     ·蛭弧菌PI 染色第48页
     ·Triton X-100 透化对杂交的影响第48页
     ·探针浓度对蛭弧菌杂交的影响第48-49页
     ·杂交时间浓度对蛭弧菌杂交的影响第49页
     ·杂交温度浓度对蛭弧菌杂交的影响第49页
   ·结果与分析第49-52页
     ·离心速度对蛭弧菌和宿主分离情况的影响第49-50页
     ·PI 染色第50页
     ·透化对杂交的影响第50-51页
     ·探针浓度对蛭弧菌杂交的影响第51-52页
     ·杂交时间对蛭弧菌杂交的影响第52页
     ·杂交温度对蛭弧菌杂交的影响第52页
   ·本章小结第52-54页
第五章 流式细胞仪测定裂解速率第54-68页
   ·引言第54页
   ·材料和与仪器第54-56页
     ·材料第54页
     ·试剂第54-55页
     ·培养基第55页
     ·溶液第55-56页
     ·仪器与设备第56页
   ·实验方法第56-59页
     ·SD6 的培养与固定第56页
     ·混合菌体培养与固定第56-57页
     ·混合样品的杂交第57页
     ·二元体系流式细胞仪测定第57-58页
     ·蛭弧菌裂解SD6 速率的检测第58-59页
       ·二元体系培养及取样方法第58页
       ·流式细胞仪测定方法第58-59页
     ·AO 染色—FCM 法检测宿主与蛭弧菌第59页
       ·甲醛处理菌体死亡率的研究第59页
       ·灭活与存活混合菌体的流式细胞仪检测第59页
   ·结果与分析第59-67页
     ·宿主的培养与固定第59页
     ·蛭弧菌的培养与固定第59页
     ·混合菌体的杂交第59-63页
     ·蛭弧菌裂解SD6 速率的检测第63-65页
     ·2%甲醛对蛭弧菌和宿主的致死性第65页
     ·AO 染色法检测宿主-蛭弧菌二元体系第65-67页
   ·本章小结第67-68页
结论与展望第68-70页
 结论第68-69页
 创新点第69页
 展望第69-70页
参考文献第70-74页
攻读硕士学位期间取得的研究成果第74-75页
致谢第75页

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