| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 烟草赖百当类二萜研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 烟草赖百当类二萜化合物分类 | 第10页 |
| 1.1.2 烟草赖百当类二萜合成途径 | 第10-11页 |
| 1.1.3 烟草赖百当类二萜合成基因 | 第11-12页 |
| 1.1.4 烟草赖百当类二萜对烟叶香气质的影响 | 第12页 |
| 1.1.5 烟草赖百当类二萜与烟叶抗病性 | 第12页 |
| 1.2 烟草腺毛研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 烟草腺毛类型与结构 | 第12-13页 |
| 1.2.3 烟草腺毛物质代谢和分泌研究进展 | 第13页 |
| 1.2.4 烟草腺毛基因表达研究 | 第13-14页 |
| 1.2.5 影响烟草腺毛密度的因素 | 第14-15页 |
| 1.2.5.1 水分 | 第14页 |
| 1.2.5.2 施肥 | 第14页 |
| 1.2.5.3 遗传物质 | 第14页 |
| 1.2.5.4 生态环境 | 第14-15页 |
| 1.3 基因编辑技术研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 基因编辑技术概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas系统作用原理 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-29页 |
| 3.1 植物材料 | 第18页 |
| 3.1.1 腺毛分泌特性研究 | 第18页 |
| 3.1.2 转基因研究 | 第18页 |
| 3.2 实验方法 | 第18-29页 |
| 3.2.1 烟草叶片DNA的提取 | 第18页 |
| 3.2.2 叶片总RNA的提取与反转录 | 第18-19页 |
| 3.2.2.1 叶片总RNA的提取 | 第18-19页 |
| 3.2.2.2 反转录cDNA | 第19页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 3.2.4 腺毛分泌物检测 | 第20页 |
| 3.2.5 叶片腺毛形态显微观察与密度统计 | 第20页 |
| 3.2.6 生物信息学分析 | 第20-21页 |
| 3.2.6.1 NtCPS2、NtABS基因启动子的序列分析 | 第20-21页 |
| 3.2.6.2 NtCPS2基因序列比对及系统进化树构建 | 第21页 |
| 3.2.7 克隆载体的构建 | 第21-22页 |
| 3.2.7.1 NtCPS2基因CDS序列与NtCPS2、NtABS基因启动子克隆引物设计 | 第21页 |
| 3.2.7.2 NtCPS2基因CDS序列与NtCPS2、NtABS基因启动子扩增 | 第21-22页 |
| 3.2.7.3 NtCPS2基因CDS序列和NtCPS2、NtABS基因启动子片段与克隆载体连接 | 第22页 |
| 3.2.8 PCR产物回收纯化 | 第22-23页 |
| 3.2.9 大肠杆菌转化 | 第23页 |
| 3.2.10 质粒提取 | 第23-24页 |
| 3.2.11 NtCPS2基因过表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 3.2.11.1 添加酶切位点 | 第24页 |
| 3.2.11.2 双酶切法构建重组质粒 | 第24-25页 |
| 3.2.12 NtCPS2基因敲除载体构建 | 第25页 |
| 3.2.13 农杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| 3.2.14 农杆菌转化 | 第25-26页 |
| 3.2.15 烟草遗传转化 | 第26-27页 |
| 3.2.15.1 烟草无菌苗的制备 | 第26页 |
| 3.2.15.2 烟草遗传转化 | 第26-27页 |
| 3.2.16 NtCPS2基因敲除中靶标位点的测序检测 | 第27-28页 |
| 3.2.17 NtCPS2基因敲除中T1代无标记基因突变株的获得 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-54页 |
| 4.1 腺毛二萜分泌特性研究 | 第29-34页 |
| 4.1.1 叶面化学成分检测分析 | 第29-31页 |
| 4.1.2 腺毛形态观察与密度统计分析 | 第31-34页 |
| 4.2 腺毛赖百当类二萜基因表达规律研究 | 第34-35页 |
| 4.2.1 不同组织间的表达规律 | 第34-35页 |
| 4.2.2 不同烟草类型间的表达规律 | 第35页 |
| 4.3 生物信息学分析 | 第35-43页 |
| 4.3.1 NtCPS2和NtABS基因启动子的序列分析 | 第35-39页 |
| 4.3.2 NtCPS2基因的序列比对分析与系统进化分析 | 第39-43页 |
| 4.3.2.1 NtCPS2基因的序列比对分析 | 第39-42页 |
| 4.3.2.2 NtCPS2基因的系统进化分析 | 第42-43页 |
| 4.4 克隆载体的构建 | 第43-45页 |
| 4.4.1 NtCPS2、NtABS基因启动子克隆载体的构建 | 第43-44页 |
| 4.4.1.1 NtCPS2、NtABS基因启动子的克隆 | 第43页 |
| 4.4.1.2 NtCPS2、NtABS基因启动子克隆载体的构建 | 第43-44页 |
| 4.4.2 NtCPS2基因克隆载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.4.2.1 NtCPS2基因CDS序列的克隆 | 第44-45页 |
| 4.4.2.2 NtCPS2基因克隆载体的构建 | 第45页 |
| 4.5 过表达载体的构建与遗传转化 | 第45-47页 |
| 4.5.1 过表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.5.2 烟草遗传转化 | 第46-47页 |
| 4.6 敲除载体的构建与阳性植株的获得 | 第47-49页 |
| 4.6.1 敲除载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.6.2 烟草遗传转化 | 第48-49页 |
| 4.7 突变纯合体鉴定与性状观察 | 第49-54页 |
| 4.7.1 T1代突变纯合体的获得 | 第49-50页 |
| 4.7.2 T1代植株长势表型观察 | 第50-52页 |
| 4.7.3 T1代植株叶面化学成分检测 | 第52-54页 |
| 5 结论与讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| ABSTRACT | 第60-61页 |
| 附件 | 第62-63页 |
