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大肠杆菌O157:H7基因缺失株构建及其生物学特性的研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 绪论第13-39页
    1.1 食源性致病菌的概述第13-14页
    1.2 基因敲除简介第14-26页
        1.2.1 基于同源重组的敲除方法第15-24页
        1.2.2 CRISPR/Cas9技术第24-26页
    1.3 细菌VBNC状态第26-31页
        1.3.1 VBNC状态的形成与复苏第27-29页
        1.3.2 VBNC状态细菌的生理变化第29-30页
        1.3.3 VBNC状态细菌的检测第30-31页
    1.4 细菌耐酸性概述第31-34页
    1.5 相关基因简述第34-36页
        1.5.1 fimC基因第34-35页
        1.5.2 luxS基因第35页
        1.5.3 rpoS基因第35-36页
    1.6 本课题研究目的与意义第36-39页
        1.6.1 立项依据及意义第36-37页
        1.6.2 研究内容第37-39页
第二章 Red重组法构建大肠杆菌O157:H7基因突变菌株第39-63页
    2.1 引言第39-40页
    2.2 实验材料与设备第40-43页
        2.2.1 主要试剂第40页
        2.2.2 菌株与质粒第40-41页
        2.2.3 培养基和缓冲液的配制第41页
        2.2.4 引物合成第41-42页
        2.2.5 主要仪器设备第42-43页
    2.3 实验方法第43-54页
        2.3.1 大肠杆菌O157:H7感受态细胞的制备和DNA转化第43-48页
        2.3.2 打靶DNA片段的扩增及回收第48-50页
        2.3.3 Red系统介导的同源重组及重组子的筛选第50-53页
        2.3.4 卡那霉素抗性基因的消除第53-54页
    2.4 结果与讨论第54-61页
        2.4.1 质粒PCR电泳结果第54-57页
        2.4.2 打靶DNA片段的扩增第57-58页
        2.4.3 Red重组酶介导的同源重组结果验证第58-60页
        2.4.4 卡那霉素抗性基因消除验证结果第60-61页
    2.5 本章小结第61-63页
第三章 大肠杆菌缺陷株VBNC状态的诱导第63-75页
    3.1 引言第63页
    3.2 实验材料与设备第63-65页
        3.2.1 实验菌株第63-64页
        3.2.2 本章实验的主要试剂与仪器第64-65页
    3.3 实验方法第65-67页
        3.3.1 菌株的培养第65页
        3.3.2 生长曲线的测定第65页
        3.3.3 富营养低温诱导VBNC的方法第65-66页
        3.3.4 细菌可培养数的测定第66页
        3.3.5 荧光显微镜观察第66-67页
    3.4 结果与分析第67-73页
        3.4.1 不同菌株的生长曲线测定结果第67-68页
        3.4.2 不同菌株在富营养环境下VBNC诱导情况第68-72页
        3.4.3 菌株荧光显微镜观察结果第72-73页
    3.5 本章小结第73-75页
第四章 大肠杆菌缺陷株的生物学特性研究第75-89页
    4.1 引言第75页
    4.2 实验材料与设备第75-77页
        4.2.1 实验菌株第75-76页
        4.2.2 实验设备第76-77页
        4.2.3 实验材料第77页
    4.3 实验方法第77-80页
        4.3.1 细菌的活化第77-78页
        4.3.2 基因缺陷株的遗传稳定性研究第78页
        4.3.3 细菌运动性实验第78-79页
        4.3.4 耐酸性实验第79页
        4.3.5 生物被膜形成能力的评价第79-80页
    4.4 结果与讨论第80-87页
        4.4.1 基因缺陷菌株的遗传稳定性第80-81页
        4.4.2 细菌突变株的运动性的测定结果第81-82页
        4.4.3 细菌缺陷株耐酸性的差异第82-85页
        4.4.4 细菌缺陷株生物被膜形成能力的测定结果第85-87页
    4.5 本章小结第87-89页
第五章 全文总结第89-91页
    5.1 总结第89-90页
    5.2 本文创新点第90页
    5.3 研究展望第90-91页
参考文献第91-105页
致谢第105-106页

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