| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第12-26页 |
| 第一章 病原细菌Ⅲ型分泌系统装置的概述 | 第12-18页 |
| 1 Ⅲ型分泌系统的简况 | 第12-13页 |
| 2 Ⅲ型分泌系统的形态结构 | 第13-14页 |
| 3 Ⅲ型分泌系统的转位子 | 第14-18页 |
| 3.1 疏水性转位子蛋白 | 第14-15页 |
| 3.2 亲水性转位子蛋白 | 第15-18页 |
| 第二章 黄单胞菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白的研究简介 | 第18-26页 |
| 1 TAL效应蛋白的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.1 TAL的起源和分布特征 | 第19-20页 |
| 1.2 TAL效应蛋白的功能 | 第20-22页 |
| 2 non-TAL效应蛋白的研究进展 | 第22-25页 |
| 2.1 non-TAL效应蛋白的起源和特征 | 第22-23页 |
| 2.2 non-TAL效应蛋白的功能 | 第23-25页 |
| 3 结语 | 第25-26页 |
| 下篇 研究报告 | 第26-68页 |
| 第一章 疏水性转位子HrpF_(Xoo)和亲水性转位子Hpa1_(Xoo)的互作鉴定 | 第26-40页 |
| 1 材料与方法 | 第28-36页 |
| 1.1 基因序列的查找 | 第28页 |
| 1.2 质粒和菌株的使用 | 第28页 |
| 1.3 本章所用引物的设计合成 | 第28-29页 |
| 1.4 培养条件和抗生素 | 第29-30页 |
| 1.4.1 培养基 | 第29-30页 |
| 1.4.2 抗生素 | 第30页 |
| 1.4.3 培养条件 | 第30页 |
| 1.5 细菌基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 1.6 PCR扩增目的条带 | 第31页 |
| 1.7 大肠杆菌感受态的制备 | 第31-32页 |
| 1.8 质粒的提取 | 第32-33页 |
| 1.9 酶切纯化回收 | 第33页 |
| 1.10 连接 | 第33-34页 |
| 1.11 质粒的热激转化 | 第34页 |
| 1.12 酵母感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 1.13 酵母转化步骤 | 第34-36页 |
| 1.13.1 GAL4酵母双杂交原理 | 第34-35页 |
| 1.13.2 LiAc介导的酵母转化法 | 第35页 |
| 1.13.3 膜酵母双杂交载体的构建 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-38页 |
| 2.1 构建pGBKT7hpa1、pGADT7hrpF酵母表达载体 | 第36-37页 |
| 2.2 GAL4酵母双杂交验证Hpa1和HrpF蛋白互作关系 | 第37-38页 |
| 2.3 构建SUC5hpa1、SUC1hrpF膜酵母双杂交表达载体 | 第38页 |
| 2.4 膜酵母双杂交验证Hpa1和HrpF蛋白互作关系 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第二章 水稻白叶枯病菌PXO99~A中转位子互作蛋白的筛选 | 第40-56页 |
| 1 材料与方法 | 第41-48页 |
| 1.1 质粒和菌株的使用 | 第41页 |
| 1.2 本章所用引物的设计合成 | 第41-42页 |
| 1.3 黄单胞菌PXO99~A感受态的制备 | 第42页 |
| 1.4 电击转化法 | 第42-43页 |
| 1.5 蛋白的表达 | 第43页 |
| 1.6 Western blotting检测 | 第43-46页 |
| 1.6.1 试剂的准备 | 第43-44页 |
| 1.6.2 PAGE电泳具体步骤 | 第44-45页 |
| 1.6.3 转膜具体步骤 | 第45页 |
| 1.6.4 免疫反应 | 第45-46页 |
| 1.6.5 化学发光 | 第46页 |
| 1.7 免疫共沉淀实验 | 第46-47页 |
| 1.8 蛋白质谱分析 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-53页 |
| 2.1 蛋白的表达 | 第48-51页 |
| 2.1.1 重组质粒pHM1hpa1、pHM1hrpF的构建 | 第48-49页 |
| 2.1.2 重组质粒pHM1hpa1、pHM1hrpF电转入黄单胞菌PXO99~A | 第49-50页 |
| 2.1.3 蛋白Hpa1和HrpF的表达 | 第50-51页 |
| 2.2 免疫共沉淀(CO-IP)实验 | 第51-53页 |
| 2.3 质谱鉴定结果的统计 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| 第三章 水稻白叶枯病菌PXO99~A中效应因子XopN的病理功能研究 | 第56-68页 |
| 1 材料与方法 | 第57-60页 |
| 1.1 供试水稻品种 | 第57页 |
| 1.2 供试烟草 | 第57-58页 |
| 1.3 菌株和质粒的使用 | 第58页 |
| 1.4 本章所用引物的设计合成 | 第58页 |
| 1.5 XopN缺失突变体的产生 | 第58-59页 |
| 1.6 PXO99~A△XopN突变体回补菌株的产生 | 第59-60页 |
| 1.6.1 构建pHM1XopN回补载体 | 第59页 |
| 1.6.2 PXO99~A△XopN突变体功能回补菌株的产生 | 第59-60页 |
| 1.7 细菌生长速度的测定 | 第60页 |
| 1.8 PXO99~A△XopN突变体对水稻致病性测定 | 第60页 |
| 1.9 突变体菌株在烟草上引起的过敏反应的测定 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-66页 |
| 2.1 PXO99~A△XopN缺失突变菌株的构建 | 第60-62页 |
| 2.2 突变体中XopN基因回补菌株的构建验证 | 第62-63页 |
| 2.3 XopN对PXO99~A菌株生长速度的影响 | 第63-64页 |
| 2.4 PXO99~A△XopN缺失突变体对水稻致病力影响 | 第64-65页 |
| 2.5 PXO99~A△XopN突变体菌株在烟草上引起过敏反应的情况 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
