| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-42页 |
| 1. 天冬酰胺糖基化修饰是真核细胞中重要的蛋白质翻译后修饰方式 | 第12-14页 |
| 2. 植物中蛋白N-糖基化修饰的研究现状 | 第14-28页 |
| 2.1 N-糖原前体在内质网膜上的生物合成 | 第14-16页 |
| 2.2 N-糖原前体向新生肽链特定Asn残基的转移 | 第16-18页 |
| 2.3 N-glycan在ER中的剪切及对多肽的影响 | 第18-22页 |
| 2.4 N-glycan在高尔基体内成熟和分拣 | 第22-27页 |
| 2.5 N-糖基化修饰相关的蛋白质组学研究 | 第27-28页 |
| 3. 植物非生物胁迫响应与适应 | 第28-33页 |
| 3.1 自然环境和农业生态系统中植物面临的非生物胁迫 | 第28-30页 |
| 3.2 植物非生物胁迫响应的分子机制 | 第30-33页 |
| 4. 高等植物细胞壁纤维素的生物合成 | 第33-38页 |
| 4.1 高等植物细胞壁的组成 | 第33-34页 |
| 4.2 细胞壁纤维素的生物合成 | 第34-38页 |
| 5. 选题的目的与意义 | 第38-39页 |
| 6. 研究的基本思路 | 第39-42页 |
| 第二章 材料与方法 | 第42-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-45页 |
| 2.1.1 拟南芥种子及培养条件 | 第42-43页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第43页 |
| 2.1.3 抗体、试剂和试剂盒 | 第43-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-64页 |
| 2.2.1 拟南芥基因型鉴定(Genotyping) | 第45-47页 |
| 2.2.2 拟南芥总RNA提取 | 第47-48页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第48页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR (Realtime q-PCR) | 第48-49页 |
| 2.2.5 拟南芥蛋白质快速提取、电泳与检测 | 第49-52页 |
| 2.2.6 盐胁迫处理 | 第52页 |
| 2.2.7 渗透胁迫处理 | 第52页 |
| 2.2.8 生物胁迫处理 | 第52-53页 |
| 2.2.9 根生长曲线绘制 | 第53页 |
| 2.2.10 质粒构建及农杆菌介导的拟南芥转化 | 第53-56页 |
| 2.2.11 盐耐受测试 | 第56页 |
| 2.2.12 纤维素荧光检测 | 第56页 |
| 2.2.13 树脂切片 | 第56-57页 |
| 2.2.14 内切糖苷酶消化检测蛋白糖基化水平 | 第57页 |
| 2.2.15 蛋白稳定性检测 | 第57页 |
| 2.2.16 GUS融合蛋白表达检测 | 第57-59页 |
| 2.2.17 MALDI-TOF-MS鉴定蛋白质 | 第59-61页 |
| 2.2.18 LC-MS/MS鉴定N-糖基化多肽 | 第61-64页 |
| 第三章 结果与分析 | 第64-104页 |
| 3.1 N-glycan剪切参与调控拟南芥非生物胁迫响应 | 第64-76页 |
| 3.1.1 N-glycan相关突变体纯合植株的鉴定 | 第64-65页 |
| 3.1.2 正常条件下野生型和突变体的表型无显著差异 | 第65-66页 |
| 3.1.3 盐胁迫条件下stt3a,mns1 mns2和cgll突变体出现敏感表型 | 第66-67页 |
| 3.1.4 温和的渗透胁迫诱导mns1 mns2产生根生长异常表型 | 第67-68页 |
| 3.1.5 mns1 mns2在生物胁迫信号存在条件下无明显表型 | 第68-70页 |
| 3.1.6 MNS1和MNS2的功能缺失导致mns1 mns2的胁迫敏感表型 | 第70-72页 |
| 3.1.7 在WT中过表达MNS1能够增强耐盐性 | 第72-73页 |
| 3.1.8 N-glycan的C支链a1,2-Man携带盐耐受调控信号 | 第73-76页 |
| 3.2 N-glycan剪切参与调控纤维素合成关键酶RSW2的表达 | 第76-86页 |
| 3.2.1 盐敏感根尖细胞壁纤维素合成缺陷 | 第76-77页 |
| 3.2.2 mns1 mns2等盐敏感突变体与纤维素合成缺陷突变体rsw2-1表型相似 | 第77-80页 |
| 3.2.3 RSW2是受糖基化调控的盐响应蛋白 | 第80-82页 |
| 3.2.4 N-glycan成熟突变体中RSW2蛋白的丰度下降 | 第82-83页 |
| 3.2.5 RSW2-GUS的表达受N-glycan调控 | 第83-85页 |
| 3.2.6 RSW2携带N-glycan的分析检测 | 第85-86页 |
| 3.3 高尔基体N-glycan信号参与调控RSW2/rsw2-1蛋白水平 | 第86-95页 |
| 3.3.1 alg3 rsw2-1,cgll rsw2-1以及mns1 mns2 rsw2-1的获取和表型分析 | 第86-88页 |
| 3.3.2 rsw2-1及其多重突变体的RSW2G429R蛋白水平检测 | 第88-89页 |
| 3.3.3 甘露糖苷酶抑制剂处理rsw2-1幼苗致死 | 第89-90页 |
| 3.3.4 N-glycan C支链α1,2-甘露糖参与调控了rsw2-1的蛋白水平 | 第90-93页 |
| 3.3.5 rsw2-1蛋白的可能降解机制 | 第93-95页 |
| 3.4 mns1mns2与cgll的差异蛋白质组分析 | 第95-104页 |
| 3.4.1 盐处理前后N-glycan成熟突变体中糖基化多肽和蛋白鉴定 | 第95-97页 |
| 3.4.2 N-glycan成熟突变体中盐胁迫响应蛋白分析 | 第97-104页 |
| 第四章 讨论 | 第104-110页 |
| 4.1 Golgi MNS1和MNS2对于拟南芥盐和渗透胁迫响应是不可或缺的 | 第104页 |
| 4.2 MNS1和MNS2介导的N-glycan剪切可能生成重要调控信号 | 第104-105页 |
| 4.3 RSW2/KOR1的蛋白稳态对高盐和N-glycan修饰缺陷敏感 | 第105-106页 |
| 4.4 MNS1和MNS2可能在高尔基体蛋白分拣过程发挥作用 | 第106-107页 |
| 4.5 rsw2-1可能在顺面高尔基体经历蛋白质质量控制 | 第107-108页 |
| 4.6 突变体mns1 mns2与cgll通过调控不同的底物糖蛋白影响胁迫响应 | 第108-110页 |
| 第五章 结论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-126页 |
| 附录 | 第126-128页 |
| 待发表的论文 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
