| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 灰葡萄孢概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 灰葡萄孢菌生命周期 | 第13-14页 |
| 1.1.2 灰霉菌国内外研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.3 丝状真菌遗传转化研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 单羧酸转运蛋白概述 | 第16-19页 |
| 1.2.1 MCT1 | 第17-18页 |
| 1.2.2 MCT2 | 第18页 |
| 1.2.3 MCT3 | 第18页 |
| 1.2.4 MCT4 | 第18-19页 |
| 1.2.5 MCT8 | 第19页 |
| 1.2.6 MCT10 | 第19页 |
| 1.2.7 单羧酸转运蛋白研究展望 | 第19页 |
| 1.3 选题意义 | 第19-21页 |
| 第二章 灰葡萄孢T-DNA突变体库的构建及突变体筛选 | 第21-47页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 材料 | 第21-25页 |
| 2.2.1 菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第21-23页 |
| 2.2.3 抗生素和培养基 | 第23-25页 |
| 2.3 方法 | 第25-34页 |
| 2.3.1 菌株的活化和培养 | 第25页 |
| 2.3.2 农杆菌介导的灰葡萄孢的转化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 转化子的分离纯化及保种 | 第26页 |
| 2.3.4 利用CFW对突变株的筛选 | 第26页 |
| 2.3.5 突变株的分子鉴定 | 第26-34页 |
| 2.3.5.1 灰葡萄孢菌基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.5.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2.3.5.3 突变株的潮霉素抗性基因鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.5.4 T-DNA插入位点侧翼DNA序列的获得和测序 | 第29-34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-44页 |
| 2.4.1 灰葡萄孢突变株的获得 | 第35页 |
| 2.4.2 T-DNA插入灰葡萄孢细胞壁完整性缺陷突变株的获得 | 第35页 |
| 2.4.3 突变株的分子鉴定 | 第35-44页 |
| 2.4.3.1 潮霉素抗性基因的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.3.2 T-DNA插入位点侧翼DNA序列的获得 | 第36-37页 |
| 2.4.3.3 T-DNA插入位点侧翼DNA序列的TA克隆 | 第37页 |
| 2.4.3.4 T-DNA插入位点的侧翼DNA序列分析 | 第37-44页 |
| 2.5 灰葡萄孢突变株的生物学特性分析 | 第44-46页 |
| 2.6 讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 灰葡萄孢T-DNA突变株的分子鉴定 | 第47-61页 |
| 3.1 前言 | 第47页 |
| 3.2 材料 | 第47-48页 |
| 3.2.1 菌株 | 第47页 |
| 3.2.2 试剂 | 第47-48页 |
| 3.2.3 抗生素和培养基 | 第48页 |
| 3.3 方法 | 第48-57页 |
| 3.3.1 RT-PCR检测T-DNA插入突变基因的表达情况 | 第48-52页 |
| 3.3.2 T-DNA插入突变株的Southern blotting分析 | 第52-57页 |
| 3.4 结果与分析 | 第57-60页 |
| 3.4.1 T-DNA插入突变基因的表达情况 | 第57页 |
| 3.4.2 T-DNA插入突变株的Southern blotting分析 | 第57-60页 |
| 3.4.2.1 探针的制备及其标记效率的检测 | 第57-58页 |
| 3.4.2.2 突变株基因组DNA的提取及酶切 | 第58-59页 |
| 3.4.2.3 突变株Southern blotting检测及分析 | 第59-60页 |
| 3.5 讨论 | 第60-61页 |
| 第四章 突变株目标基因的互补及基因功能的研究 | 第61-75页 |
| 4.1 前言 | 第61页 |
| 4.2 材料 | 第61-62页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第61页 |
| 4.2.2 试剂 | 第61-62页 |
| 4.2.3 抗生素和培养基 | 第62页 |
| 4.3 方法 | 第62-68页 |
| 4.3.1 突变株目的基因的遗传互补 | 第62-68页 |
| 4.3.1.1 目的基因的TA克隆 | 第62-64页 |
| 4.3.1.2 构建入门载体pETHG-Bc74 | 第64-66页 |
| 4.3.1.3 构建双元载体pCAMBIA-Bar-Bc74 | 第66-67页 |
| 4.3.1.4 农杆菌介导灰葡萄孢突变株的转化及分子鉴定 | 第67-68页 |
| 4.3.1.4.1 农杆菌介导灰葡萄孢突变株的转化 | 第67-68页 |
| 4.3.2 菌株的生物学特性及致病性研究 | 第68页 |
| 4.3.2.1 菌株的生物学特性分析 | 第68页 |
| 4.3.2.2 菌株的致病性研究 | 第68页 |
| 4.4 结果与分析 | 第68-74页 |
| 4.4.1 突变株目的基因的遗传互补 | 第68-72页 |
| 4.4.1.1 目的基因的TA克隆 | 第68-70页 |
| 4.4.1.2 构建入门载体pETHG-Bc74 | 第70页 |
| 4.4.1.3 构建质粒pCAMBIA-Bar-Bc74 | 第70-72页 |
| 4.4.2 互补菌株的获得及分子鉴定 | 第72页 |
| 4.4.3 菌株的生物学特性鉴定和致病性研究 | 第72-74页 |
| 4.4.3.1 菌株的生物学特性鉴定 | 第73页 |
| 4.4.3.2 致病性观察 | 第73-74页 |
| 4.5 讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 灰霉中BC1G_15016.1 (BcMCT1)基因功能的研究 | 第75-86页 |
| 5.1 前言 | 第75页 |
| 5.2 材料 | 第75-77页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第75页 |
| 5.2.2 试剂 | 第75-76页 |
| 5.2.3 培养基 | 第76-77页 |
| 5.3 方法 | 第77-80页 |
| 5.3.1 BcMCT1 (BC1G_15016.1)基因功能分析 | 第77-80页 |
| 5.3.1.1 菌株在单羧酸选择性培养基上生长状态 | 第77页 |
| 5.3.1.2 BcMCT1基因在酵母中的表达 | 第77-79页 |
| 5.3.1.3 菌株细胞壁和细胞结构观察 | 第79-80页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第80-85页 |
| 5.4.1 BcMCT1基因可能与单羧酸转运有关 | 第80-81页 |
| 5.4.2 BcMCT1基因在酵母中的表达 | 第81-82页 |
| 5.4.3 BcMCT1基因在灰霉细胞壁的影响 | 第82-83页 |
| 5.4.4 灰霉中单羧酸转运蛋白家族基因的系统分析 | 第83-85页 |
| 5.4.4.1 灰霉中单羧酸蛋白家族基因比对 | 第83-84页 |
| 5.4.4.2 灰霉中单羧酸蛋白家族结构分析 | 第84-85页 |
| 5.5 讨论 | 第85-86页 |
| 第六章 总结与展望 | 第86-88页 |
| 6.1 总结 | 第86-87页 |
| 6.2 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第93页 |
