| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1.1 合浦珠母贝的简介 | 第13页 |
| 1.1.2 软体动物免疫系统的研究现状 | 第13-19页 |
| 1.1.2.1 贝类的细胞免疫研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.2.2 贝类的体液免疫研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1.3 珍珠养殖的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.1.4 胸腺素β4的功能及研究现状 | 第20-22页 |
| 1.2 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 合浦珠母贝胸腺素β4基因的各组织表达分析及原核表达 | 第23-47页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第24页 |
| 2.2.3 实验试剂与配制 | 第24-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-39页 |
| 2.3.1 实验用品预处理 | 第27页 |
| 2.3.2 总RNA提取 | 第27页 |
| 2.3.3 cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 2.3.4 Pfthymosin β4的获取 | 第28-32页 |
| 2.3.4.1 Pfthymosin β4基因的获取与引物设计 | 第28-29页 |
| 2.3.4.2 Pfthymosin β4基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.4.3 胶回收PCR目标产物 | 第30页 |
| 2.3.4.4 PCR目标产物的连接与转化 | 第30-31页 |
| 2.3.4.5 挑取单克隆与菌液PCR | 第31-32页 |
| 2.3.5 Pfthymosin β4基因的生物信息学分析与进化树构建 | 第32页 |
| 2.3.6 Pfthymosin β4基因的定量表达分析 | 第32-34页 |
| 2.3.7 Pfthymosin β4基因的原核表达 | 第34-39页 |
| 2.3.7.1 原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.3.7.2 pET-28a-Pfthymosin β4重组质粒诱导表达条件的优化 | 第36-37页 |
| 2.3.7.3 蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第37页 |
| 2.3.7.4 蛋白免疫印迹WesternBlotting | 第37-38页 |
| 2.3.7.5 Pfthymosin β4重组蛋白纯化 | 第38-39页 |
| 2.4 实验结果 | 第39-45页 |
| 2.4.1 Pfthymosin β4序列与生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 2.4.2 Pfthymosin β4的多重序列比对与进化树分析 | 第40-43页 |
| 2.4.3 Pfthymosin β4基因在不同组织及各个发育时期的表达分析 | 第43-44页 |
| 2.4.4 Pfthymosin β4重组蛋白的原核表达 | 第44-45页 |
| 2.4.4.1 Pfthymosin β4重组蛋白原核表达条件的优化 | 第44页 |
| 2.4.4.2 Pfthymosin β4重组蛋白的纯化与Western Blotting | 第44-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 合浦珠母贝胸腺素β4的抗菌能力与重金属和H2O2耐受性分析 | 第47-59页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第47-48页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第48页 |
| 3.2.3 实验试剂与配制 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.3.1 实验用品预处理 | 第48-49页 |
| 3.3.2 总RNA提取 | 第49页 |
| 3.3.3 cDNA的合成 | 第49页 |
| 3.3.4 免疫刺激下基因Pfthymosin β4的定量表达分析 | 第49页 |
| 3.3.5 重组蛋白Pfthymosin β4的纯化 | 第49页 |
| 3.3.6 琼脂扩散法检测重组蛋白Pfthymosin β4的体外抗菌能力 | 第49-50页 |
| 3.3.7 液体培养基法检测重组蛋白Pfthymosin β4的体外抗菌能力 | 第50页 |
| 3.3.8 在重金属胁迫下Pfthymosin β4对大肠杆菌的保护作用 | 第50-51页 |
| 3.3.9 在H_2O_2胁迫下Pfthymosin β4对大肠杆菌的保护作用 | 第51页 |
| 3.4 实验结果 | 第51-56页 |
| 3.4.1 免疫刺激后Pfthymosin β4相对表达量的变化 | 第51-52页 |
| 3.4.2 重组蛋白Pfthymosin β4在琼脂扩散法中的体外抗菌能力 | 第52页 |
| 3.4.3 重组蛋白Pfthymosin β4在液体培养基法中的体外抗菌能力 | 第52-54页 |
| 3.4.4 重金属胁迫下Pfthymosin β4对大肠杆菌的保护作用 | 第54-55页 |
| 3.4.5 H_2O_2胁迫下Pfthymosin β4对大肠杆菌的保护作用 | 第55-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 合浦珠母贝胸腺素β4促进伤口愈合的功能分析 | 第59-72页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第59页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第59-60页 |
| 4.2.3 实验试剂与配制 | 第60页 |
| 4.3 实验方法 | 第60-64页 |
| 4.3.1 实验用品预处理 | 第60页 |
| 4.3.2 总RNA提取 | 第60页 |
| 4.3.3 cDNA的合成 | 第60页 |
| 4.3.4 插核手术后基因Pfthymosin β4的定量表达分析 | 第60页 |
| 4.3.5 重组蛋白Pfthymosin β4的纯化 | 第60-61页 |
| 4.3.6 MTT法检测Pfthymosin β4对小鼠主动脉血管平滑肌细胞(MOVAS)的增殖能力 | 第61页 |
| 4.3.7 细胞划痕检测Pfthymosin β4对小鼠主动脉血管平滑肌细胞(MOVAS)的迁移能力 | 第61-62页 |
| 4.3.8 体内注射原核表达或化学合成的Pfthymosin β4对循环血细胞的影响 | 第62页 |
| 4.3.9 沉默Pfthymosin β4对循环血细胞影响分析 | 第62-63页 |
| 4.3.10 体内注射原核表达或化学合成的Pfthymosin β4对合浦珠母贝伤口愈合的影响 | 第63-64页 |
| 4.4 实验结果 | 第64-69页 |
| 4.4.1 插核手术后Pfthymosin β4的表达情况 | 第64页 |
| 4.4.2 重组Pfthymosin β4对MOVAS增殖能力的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.3 重组Pfthymosin β4对MOVAS迁移能力的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.4 注射Pfthymosin β4对循环血细胞数量的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.5 沉默Pfthymosin β4对循环血细胞数量的影响 | 第67-68页 |
| 4.4.6 注射Pfthymosin β4对合浦珠母贝伤口愈合的影响 | 第68-69页 |
| 4.5 讨论 | 第69-72页 |
| 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
