| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-31页 |
| 1.1 芽胞的研究概述 | 第13-22页 |
| 1.1.1 芽胞的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 芽胞的形成 | 第14-15页 |
| 1.1.3 芽胞衣的结构组分及组装 | 第15-17页 |
| 1.1.3.1 芽胞衣的结构组分 | 第15-16页 |
| 1.1.3.2 芽胞衣的组装 | 第16-17页 |
| 1.1.4 芽胞外壁的结构组分、组装及功能 | 第17-20页 |
| 1.1.4.1 芽胞外壁的结构组分 | 第17-18页 |
| 1.1.4.2 芽胞外壁的组装 | 第18-20页 |
| 1.1.5 芽胞的抗性 | 第20-22页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌及其伴胞晶体概述 | 第22-24页 |
| 1.2.1 苏云金芽胞杆菌 | 第22页 |
| 1.2.2 苏云金芽胞杆菌的伴胞晶体 | 第22-24页 |
| 1.2.2.1 杀虫晶体蛋白的命名与分类 | 第22-23页 |
| 1.2.2.2 杀虫晶体蛋白的定位 | 第23页 |
| 1.2.2.3 杀虫晶体蛋白的杀虫谱 | 第23-24页 |
| 1.3 秀丽隐杆线虫及其防御行为 | 第24-25页 |
| 1.3.1 秀丽隐杆线虫简介 | 第24页 |
| 1.3.2 秀丽隐杆线虫对Bt的防御行为 | 第24-25页 |
| 1.4 晶胞粘连现象的研究进展 | 第25-29页 |
| 1.5 晶胞粘连现象的研究目的及意义 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-40页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和引物 | 第31-36页 |
| 2.1.2 供试抗生素 | 第36页 |
| 2.1.3 培养基及培养条件 | 第36-38页 |
| 2.1.4 试剂、耗材和仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.4.1 试剂和耗材 | 第38页 |
| 2.1.4.2 仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.5 缓冲液、试剂及配方 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-53页 |
| 2.2.1 核酸及蛋白质的分子生物学基本操作 | 第40-42页 |
| 2.2.1.1 苏云金芽胞杆菌总DNA的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.1.2 苏云金芽胞杆菌质粒的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.1.3 DNA的脱盐 | 第42页 |
| 2.2.1.4 快速PCR模板的制备 | 第42页 |
| 2.2.1.5 PCR扩增 | 第42页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备及转化 | 第42-44页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌CaCl_2转化法感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.2.2 大肠杆菌的CaCl_2法转化 | 第43页 |
| 2.2.2.3 苏云金芽胞杆菌电转化法感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 2.2.2.4 苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第43-44页 |
| 2.2.2.5 转化重组子的筛选 | 第44页 |
| 2.2.3 晶胞混合物的制备 | 第44页 |
| 2.2.4 光学显微镜观察 | 第44页 |
| 2.2.5 晶体蛋白的SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| 2.2.5.1 SDS-PAGE样品的制备 | 第44-45页 |
| 2.2.5.2 SDS-PAGE胶的配制 | 第45页 |
| 2.2.5.3 电泳检测及染色、脱色 | 第45页 |
| 2.2.6 苏云金芽胞杆菌C15菌株基因敲除方法 | 第45-46页 |
| 2.2.6.1 苏云金芽胞杆菌C15菌株基因敲除载体的构建策略 | 第45-46页 |
| 2.2.6.2 苏云金芽胞杆菌C15菌株基因敲除突变株的筛选及验证 | 第46页 |
| 2.2.7 细菌双杂交实验方法 | 第46-47页 |
| 2.2.7.1 细菌双杂交诱饵构建 | 第47页 |
| 2.2.7.2 细菌双杂交文库筛选 | 第47页 |
| 2.2.8 苏云金芽胞杆菌C15高温消质粒实验方案 | 第47-48页 |
| 2.2.9 苏云金芽胞杆菌C15基因组测序与拼接 | 第48页 |
| 2.2.10 秀丽隐杆线虫培养及生物测定实验 | 第48-50页 |
| 2.2.10.1 秀丽小杆线虫的同步培养 | 第48-49页 |
| 2.2.10.2 Bt的晶胞混合物对秀丽隐杆线虫的生物活性测定 | 第49页 |
| 2.2.10.3 秀丽隐杆线虫趋化实验方案 | 第49-50页 |
| 2.2.10.4 秀丽隐杆线虫取食频率实验 | 第50页 |
| 2.2.11 苏云金芽胞杆菌晶胞混合物的抗逆实验 | 第50-53页 |
| 2.2.11.1 紫外处理实验方案 | 第50-51页 |
| 2.2.11.2 pH处理实验方案 | 第51-52页 |
| 2.2.11.3 温度处理实验方案 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-74页 |
| 3.1 苏云金芽胞杆菌C15粘连表型相关基本属性的鉴定 | 第53-64页 |
| 3.1.1 苏云金芽胞杆菌C15的遗传学背景 | 第53-56页 |
| 3.1.1.1 苏云金芽胞杆菌C15全基因组的基本信息 | 第53-54页 |
| 3.1.1.2 苏云金芽胞杆菌C15粘连因子所在的质粒的确定 | 第54-56页 |
| 3.1.2 苏云金芽胞杆菌C15中粘连晶体成分的确定 | 第56-62页 |
| 3.1.2.1 苏云金芽胞杆菌C15中cry基因的预测 | 第56-57页 |
| 3.1.2.2 C15中的四个Cry蛋白均是粘连晶体的组分 | 第57-58页 |
| 3.1.2.3 苏云金芽胞杆菌C15中晶体蛋白对粘连表型均有不同程度的影响 | 第58-62页 |
| 3.1.4 与粘连晶体蛋白互作芽胞结构蛋白组份确定 | 第62-64页 |
| 3.2 晶胞粘连表型有利于提高苏云金芽胞杆菌的适应性 | 第64-74页 |
| 3.2.1 晶胞粘连表型对苏云金芽胞杆菌的生物学意义 | 第64-65页 |
| 3.2.2 粘连表型自然环境适应性方面的优势——对晶体具有保护作用 | 第65-70页 |
| 3.2.2.1 晶胞粘连能够维持晶体在偏酸偏碱环境下的稳定性 | 第66-67页 |
| 3.2.2.2 晶胞粘连能够延长晶体在不同温度下的存在时间 | 第67-69页 |
| 3.2.2.3 晶胞粘连能够维持粘连晶体在紫外环境下的稳定性 | 第69-70页 |
| 3.2.3 粘连表型在宿主适应型方面的优势——能够引起宿主的趋向性 | 第70-74页 |
| 3.2.3.1 晶胞粘连表型对秀丽隐杆线虫趋向性行为有影响 | 第70-71页 |
| 3.2.3.2 晶胞粘连表型对秀丽隐杆线虫趋向行为的影响具有普遍性 | 第71-73页 |
| 3.2.3.3 晶胞粘连表型能够影响秀丽隐杆线虫的取食 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-78页 |
| 4.1 假定粘连因子序列的推测 | 第74页 |
| 4.2 秀丽隐杆线虫对有活性苏云金芽胞杆菌晶胞混合物有偏爱性 | 第74-76页 |
| 4.3 晶胞粘连表型可能会影响苏云金芽胞杆菌芽胞的萌发 | 第76-77页 |
| 4.4 晶胞粘连表型菌株有研制生物囊杀虫剂的潜力 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录 | 第85-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
