| 摘要 | 第6-9页 |
| abstract | 第9-11页 |
| 中英文缩略词表 | 第21-24页 |
| 第一章 绪论 | 第24-38页 |
| 1.1 肿瘤血管生成和肿瘤微环境 | 第24-27页 |
| 1.2 FOXQ1基因研究进展 | 第27-35页 |
| 1.2.1 FOXQ1蛋白结构和DNA结合元件 | 第28-29页 |
| 1.2.2 FOXQ1基因在不同类型肿瘤中异常表达的临床意义和分子作用机制的研究进展 | 第29-33页 |
| 1.2.3 FOXQ1基因生物学功能的研究进展 | 第33-35页 |
| 1.3 本课题的选题依据 | 第35-36页 |
| 1.4 本课题的研究目的与意义 | 第36-37页 |
| 1.5 本课题的技术路线 | 第37-38页 |
| 第二章 FOXQ1基因在结直肠癌肿瘤血管生成和肿瘤微环境改造中的作用研究 | 第38-88页 |
| 2.1 前言 | 第38-39页 |
| 2.2 结直肠癌细胞株中FOXQ1的表达水平及稳定高/低表达FOXQ1结直肠癌细胞株的构建 | 第39-60页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第39-46页 |
| 2.2.1.1 实验细胞和质粒 | 第39页 |
| 2.2.1.2 实验主要试剂 | 第39-42页 |
| 2.2.1.3 主要仪器与耗材 | 第42-43页 |
| 2.2.1.4 主要试剂的配制 | 第43-46页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第46-56页 |
| 2.2.2.1 构建基于慢病毒表达载体PLKO.1-puro的FOXQ1-shRNA载体,获得稳转细胞系DLD1-shFOXQ1 | 第46-50页 |
| 2.2.2.2 构建基于pAcGFP1-N1的FOXQ1真核表达载体,获得HCT116-FOXQ1稳转细胞系 | 第50-51页 |
| 2.2.2.3 稳转细胞株FOXQ1低表达/过表达效率的鉴定 | 第51-56页 |
| 2.2.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 2.2.3.1 根据各结直肠癌细胞系FOXQ1表达水平,分别选择DLD1和HCT116作为FOXQ1基因沉默和过表达的细胞模型 | 第56-57页 |
| 2.2.3.2 qRT-PCR和WB检测验证了FOXQ1基因在DLD1和HCT116细胞中被有效的沉默和过表达 | 第57-59页 |
| 2.2.4 讨论 | 第59-60页 |
| 2.3 不同FOXQ1表达水平的结直肠肿瘤细胞对HUVECs增殖、迁移和脉管生成能力的影响 | 第60-77页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第60-62页 |
| 2.3.1.1 实验细胞和质粒 | 第60页 |
| 2.3.1.2 主要实验试剂 | 第60-61页 |
| 2.3.1.3 主要仪器与耗材 | 第61-62页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 2.3.2.1 不同比例的结直肠癌肿瘤细胞培养上清液对HUVECs增殖活性的影响 | 第62-63页 |
| 2.3.2.2 结直肠癌肿瘤细胞条件培养基对HUVECs迁移能力的影响 | 第63页 |
| 2.3.2.3 FOXQ1对血管内皮细胞管状结构形成能力的影响 | 第63-65页 |
| 2.3.2.4 统计学分析 | 第65页 |
| 2.3.3 实验结果 | 第65-75页 |
| 2.3.3.1 不同比例的结直肠癌肿瘤细胞培养上清液对HUVECs增殖活性的影响 | 第65-67页 |
| 2.3.3.2 结直肠癌肿瘤细胞培养上清液对HUVECs迁移能力的影响 | 第67-69页 |
| 2.3.3.3 FOXQ1对HUVECs管状结构形成能力的影响 | 第69-75页 |
| 2.3.4 讨论 | 第75-77页 |
| 2.4 FOXQ1对结直肠癌小鼠移植瘤模型肿瘤血管生成和肿瘤微环境改造中的作用 | 第77-87页 |
| 2.4.1 实验材料 | 第77-79页 |
| 2.4.1.1 实验动物和细胞 | 第77页 |
| 2.4.1.2 实验主要试剂 | 第77-78页 |
| 2.4.1.3 主要试剂的配制 | 第78-79页 |
| 2.4.1.4 主要仪器与耗材 | 第79页 |
| 2.4.2 实验方法 | 第79-82页 |
| 2.4.2.1 细胞培养及分组 | 第79页 |
| 2.4.2.2 稳定沉默FOXQ1的DLD1细胞致瘤小鼠模型的建立 | 第79-80页 |
| 2.4.2.3 观察指标和肿瘤组织的保存 | 第80页 |
| 2.4.2.4 小鼠结肠癌DLD1细胞移植瘤组织病理学检查 | 第80页 |
| 2.4.2.5 免疫组化检测人结直肠癌组织中FOXQ1及F4/80的表达 | 第80-81页 |
| 2.4.2.6 免疫组织化学检测小鼠移植瘤模型肿瘤组织中CD31和CD34的表达及肿瘤微血管密度(MicrovesselDensity,MVD)计数 | 第81-82页 |
| 2.4.2.7 统计学分析 | 第82页 |
| 2.4.3 实验结果 | 第82-85页 |
| 2.4.3.1 小鼠结直肠癌移植瘤模型肿瘤生长情况 | 第82页 |
| 2.4.3.2 小鼠结肠癌DLD1细胞移植瘤组织病理学检查情况 | 第82-83页 |
| 2.4.3.3 免疫组化检测人结直肠癌组织中FOXQ1及F4/80的表达 | 第83页 |
| 2.4.3.4 免疫组织化学检测小鼠移植瘤模型肿瘤组织中CD31和CD34的表达及肿瘤微血管密度(MicrovesselDensity,MVD)计数 | 第83-85页 |
| 2.4.4 讨论 | 第85-87页 |
| 2.5 本章小结 | 第87-88页 |
| 第三章 FOXQ1基因在结直肠癌肿瘤血管生成和肿瘤微环境改造中机制的初步研究 | 第88-143页 |
| 3.1 前言 | 第88-91页 |
| 3.2 FOXQ1对结直肠癌血管生成、PI3K-AKT及EGF/PDGF信号通路的影响 | 第91-116页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第91-95页 |
| 3.2.1.1 实验细胞 | 第91页 |
| 3.2.1.2 实验主要试剂 | 第91-93页 |
| 3.2.1.3 相关试剂配制 | 第93-94页 |
| 3.2.1.4 主要仪器与耗材 | 第94-95页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第95-105页 |
| 3.2.2.1 应用SuperArray功能基因芯片检测血管生成、PI3K-AKT及EGF/PDGF信号通路相关基因 | 第95-101页 |
| 3.2.2.2 应用WB检测FOXQ1对结直肠癌细胞EGF/PDGF信号通路蛋白的表达改变 | 第101页 |
| 3.2.2.3 应用qRT-PCR检测FOXQ1对结直肠癌细胞自分泌各趋化因子的表达改变 | 第101-104页 |
| 3.2.2.4 应用ELISA检测FOXQ1表达改变对CRC细胞分泌CCL2和CCL16蛋白水平的影响 | 第104-105页 |
| 3.2.3 实验结果 | 第105-113页 |
| 3.2.3.1 应用SuperArray功能基因芯片检测血管生成、PI3K-AKT及EGF/PDGF信号通路相关基因 | 第105-110页 |
| 3.2.3.2 应用WB检测FOXQ1对结直肠癌细胞EGF/PDGF信号通路蛋白的表达改变 | 第110-111页 |
| 3.2.3.3 应用qRT-PCR检测FOXQ1对结直肠癌细胞自分泌各趋化因子的表达改变 | 第111-112页 |
| 3.2.3.4 应用ELISA检测FOXQ1表达改变对CRC细胞分泌CCL2和CCL16蛋白水平的影响 | 第112-113页 |
| 3.2.4 讨论 | 第113-116页 |
| 3.3 FOXQ1表达改变对CRC细胞自身及其微环境中血管内皮细胞分泌血管生成相关蛋白的影响 | 第116-131页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第116-118页 |
| 3.3.1.1 实验细胞 | 第116页 |
| 3.3.1.2 实验主要试剂 | 第116-117页 |
| 3.3.1.3 所需的仪器和耗材 | 第117-118页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第118-122页 |
| 3.3.2.1 实验分组 | 第118页 |
| 3.3.2.2 蛋白浓度测定 | 第118-119页 |
| 3.3.2.3 定量蛋白芯片检测前的准备 | 第119-120页 |
| 3.3.2.4 定量芯片的检测 | 第120-121页 |
| 3.3.2.5 数据分析 | 第121页 |
| 3.3.2.6 实验注意事项 | 第121-122页 |
| 3.3.2.7 人血管生成因子定量抗体芯片QAH-ANG-1000所涵盖的60个抗体 | 第122页 |
| 3.3.3 实验结果 | 第122-127页 |
| 3.3.3.1 蛋白浓度检测结果 | 第122-123页 |
| 3.3.3.2 人血管生成因子定量抗体芯片QAH-ANG-1000检测结果概况 | 第123页 |
| 3.3.3.3 人血管生成因子定量抗体芯片QAH-ANG-1000检测结果分析 | 第123-127页 |
| 3.3.4 讨论 | 第127-131页 |
| 3.4 FOXQ1通过调控Twist1/CCL2轴促进巨噬细胞的征募 | 第131-142页 |
| 3.4.1 实验材料 | 第131-133页 |
| 3.4.1.1 实验动物和细胞 | 第131页 |
| 3.4.1.2 实验主要试剂 | 第131-132页 |
| 3.4.1.3 所需的仪器和耗材 | 第132-133页 |
| 3.4.2 实验方法 | 第133-136页 |
| 3.4.2.1 FOXQ1对Twist1/CCL2轴的调控作用 | 第133-135页 |
| 3.4.2.2 FOXQ1对Twist1/CCL2轴的调控作用所引起对巨噬细胞征募能力的影响 | 第135-136页 |
| 3.4.3 实验结果 | 第136-140页 |
| 3.4.3.1 FOXQ1对CCL2的调控作用是由Twist1所介导的 | 第136-138页 |
| 3.4.3.2 FOXQ1对Twist1/CCL2轴的调控作用影响了CRC细胞对巨噬细胞的征募能力 | 第138-140页 |
| 3.4.4 讨论 | 第140-142页 |
| 3.5 本章小结 | 第142-143页 |
| 第四章 应用临床样本验证FOXQ1通过Twist1/CCL2轴引起肿瘤微环境改变与肿瘤血管生成之间的相关性及对生存率的影响 | 第143-168页 |
| 4.1 前言 | 第143-144页 |
| 4.2 应用临床样本验证FOXQ1通过Twist1/CCL2轴引起肿瘤微环境改变及其与肿瘤血管生成之间的相关性 | 第144-157页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第144-145页 |
| 4.2.1.1 结肠癌组织芯片 | 第144页 |
| 4.2.1.2 实验主要试剂 | 第144-145页 |
| 4.2.1.3 相关试剂配制 | 第145页 |
| 4.2.1.4 所需的仪器和耗材 | 第145页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第145-150页 |
| 4.2.2.1 各抗体组织芯片免疫组化检测 | 第145-147页 |
| 4.2.2.2 免疫组化实验结果判读 | 第147-148页 |
| 4.2.2.3 所检测的5个抗体的原始实验数据的标准化方案 | 第148-149页 |
| 4.2.2.4 临床资料的分组方案 | 第149-150页 |
| 4.2.2.5 统计分析 | 第150页 |
| 4.2.3 实验结果 | 第150-157页 |
| 4.2.3.1 各抗体组织芯片免疫组化检测结果 | 第150-153页 |
| 4.2.3.2 FOXQ1蛋白表达与临床病理因素的相关性分析 | 第153-154页 |
| 4.2.3.3 各蛋白表达的相关性分析 | 第154-157页 |
| 4.3 应用临床样本验证FOXQ1通过Twist1/CCL2轴引起肿瘤微环境改变与肿瘤血管生成间相关性对生存率的影响 | 第157-167页 |
| 4.3.1 各蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第157-160页 |
| 4.3.1.1 FOXQ1蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第157页 |
| 4.3.1.2 Twist1蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第157页 |
| 4.3.1.3 CCL2蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第157页 |
| 4.3.1.4 CD68蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第157页 |
| 4.2.1.5 CD31蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第157-160页 |
| 4.3.2 蛋白-蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第160-164页 |
| 4.3.2.1 FOXQ1-Twist1蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第160页 |
| 4.3.2.2 FOXQ1-CCL2蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第160-161页 |
| 4.3.2.3 Twist1-CCL2蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第161页 |
| 4.3.2.4 CCL2-CD68蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第161页 |
| 4.3.2.5 FOXQ1-CD31蛋白表达与临床样本Kaplan-Meier生存率之间的相关性分析 | 第161-164页 |
| 4.3.3 讨论 | 第164-167页 |
| 4.4 本章小结 | 第167-168页 |
| 第五章 结论、创新点、存在的问题与展望 | 第168-170页 |
| 5.1 结论 | 第168页 |
| 5.2 创新点 | 第168-169页 |
| 5.3 存在的问题与展望 | 第169-170页 |
| 致谢 | 第170-172页 |
| 参考文献 | 第172-188页 |
| 附录 A：攻读学位期间发表论文和国际会议论文摘要 | 第188-189页 |
| 附录 B：攻读学位期间主持和参与的科研项目和人才培育项目 | 第189页 |
| 附录 C：攻读学位期间获奖情况 | 第189页 |
