| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 家蚕和家蚕二分浓核病毒简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 家蚕 | 第12-13页 |
| 1.1.2 家蚕二分浓核病毒简介 | 第13-14页 |
| 1.1.3 家蚕二分浓核病毒基因组结构 | 第14-15页 |
| 1.2 有关BmBDV的抗性机制研究现状 | 第15-17页 |
| 1.2.1 BmBDV导致的家蚕病理变化 | 第15-16页 |
| 1.2.2 家蚕对BmBDV抗性机制的相关研究 | 第16-17页 |
| 1.3 宿主的免疫应答以及家蚕与BmBDV的互作研究 | 第17-19页 |
| 1.3.1 昆虫的系统性免疫 | 第17页 |
| 1.3.2 家蚕与BmBDV的互作研究 | 第17-19页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 1.5 研究内容和相关实验技术以及技术路线 | 第20-25页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第20页 |
| 1.5.2 相关实验技术 | 第20-24页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 内参基因的筛选 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第25-27页 |
| 2.1.1 主要实验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要实验试剂的配置 | 第26页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 家蚕内参基因荧光定量引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2 BmBDV粗提液的提取 | 第28页 |
| 2.2.3 家蚕中肠组织的提取与保存 | 第28-29页 |
| 2.2.4 家蚕中肠的研磨与总RNA的提取及cDNA的合成 | 第29页 |
| 2.2.5 qPCR反应 | 第29页 |
| 2.2.6 RT-qPCR标准品质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第29-30页 |
| 2.2.8 内参基因稳定性分析方法 | 第30页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第30-37页 |
| 2.3.1 实时定量PCR引物特异性分析 | 第30-32页 |
| 2.3.2 内参基因表达丰度分析 | 第32-34页 |
| 2.3.4 候选内参基因稳定性分析 | 第34-36页 |
| 2.3.4.1 BestKeeper分析结果 | 第34页 |
| 2.3.4.2 geNorm分析结果 | 第34-35页 |
| 2.3.4.3 NormFinder分析结果 | 第35-36页 |
| 2.3.5 内参基因稳定性验证 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第37-39页 |
| 第三章 对BmBDV侵染的家蚕中肠组织进行转录组分析 | 第39-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 中肠总RNA的提取 | 第39页 |
| 3.2.2 RNA文库构建及测序 | 第39-40页 |
| 3.2.3 数据分析 | 第40-41页 |
| 3.2.3.1 测序原始数据处理及文库质检与序列比对 | 第40页 |
| 3.2.3.2 差异基因表达分析 | 第40页 |
| 3.2.3.3 荧光定量PCR | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-49页 |
| 3.3.1 BmBDV感染引起差异表达基因及聚类分析 | 第41-42页 |
| 3.3.2 差异表达基因筛选及数目统计 | 第42-43页 |
| 3.3.3 差异表达基因GO分析 | 第43-45页 |
| 3.3.4 差异表达基因的蛋白网络互作分析 | 第45-46页 |
| 3.3.5 差异表达基因的KEGG分析 | 第46-47页 |
| 3.3.6 BmBDV基因表达模式分析 | 第47-48页 |
| 3.3.7 qRT-PCR验证转录组测序结果可靠性 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第49-53页 |
| 第四章 BmBDV入侵抗性家蚕并表达病毒基因 | 第53-66页 |
| 4.1 材料、实验试剂与仪器 | 第53-55页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第53页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第53-54页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第54页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第54-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 取材与实时荧光定量PCR | 第55页 |
| 4.2.2 半定量 | 第55-56页 |
| 4.2.3 WesternBlot | 第56-57页 |
| 4.2.4 石蜡切片以及HE染色 | 第57页 |
| 4.2.5 免疫荧光 | 第57-58页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第58-64页 |
| 4.3.1 通过SqRT-PCR定性分析病毒基因在转录水平上的表达量 | 第58-59页 |
| 4.3.2 通过qRT-PCR定量分析病毒基因的转录水平 | 第59-61页 |
| 4.3.3 通过westernblot和免疫荧光比较分析BmBDV衣壳蛋白(VP)的表达 | 第61-63页 |
| 4.3.4 BmBDV感染家蚕中肠的病理变化 | 第63-64页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第64-66页 |
| 第五章 分析BmBDV基因组的整合性 | 第66-81页 |
| 5.1 材料、实验试剂与仪器 | 第66-68页 |
| 5.1.1 材料 | 第66页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第66页 |
| 5.1.3 主要实验仪器 | 第66-67页 |
| 5.1.4 试剂的配制 | 第67-68页 |
| 5.2 实验方法 | 第68-72页 |
| 5.2.0 取材 | 第68页 |
| 5.2.1 基因组提取 | 第68页 |
| 5.2.2 设计探针 | 第68-69页 |
| 5.2.3 DIGHighPrimeDNA标记及杂交检测 | 第69-70页 |
| 5.2.3.1 DIG-DNA标记 | 第69页 |
| 5.2.3.2 DNA转膜和固定 | 第69-70页 |
| 5.2.4 杂交 | 第70页 |
| 5.2.5 免疫检测 | 第70页 |
| 5.2.6 探针洗脱和重探 | 第70页 |
| 5.2.7 FPNI-PCR | 第70-72页 |
| 5.2.7.1 引物设计 | 第70-71页 |
| 5.2.7.2 FPNI－PCR反应体系和反应条件 | 第71-72页 |
| 5.3 实验结果及分析 | 第72-79页 |
| 5.3.1 提取基因组,通过实时定量PCR监测BmBDV病毒增殖动态 | 第72-74页 |
| 5.3.2 Southernblot分析BmBDV基因组的整合性 | 第74-77页 |
| 5.3.3 通过FPNI-PCR验证BmDBV基因组的整合性 | 第77-79页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第79-81页 |
| 第六章 总结与展望 | 第81-82页 |
| 6.1 主要工作总结 | 第81页 |
| 6.2 工作展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 在读期间发表论文及参与课题 | 第93页 |
