| 致谢 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 PRRSV病原学特点 | 第13-18页 |
| 1.1.1 PRRSV分类及理化性质 | 第13-14页 |
| 1.1.2 抗原性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 体外培养特性 | 第15页 |
| 1.1.4 病毒基因组结构特征 | 第15-16页 |
| 1.1.5 病毒主要编码的蛋白 | 第16-18页 |
| 1.1.5.1 PRRSV非结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1.1.5.2 PRRSV结构蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2 流行病学 | 第18-19页 |
| 1.3 PRRSV的致病机理 | 第19页 |
| 1.4 我国PRRSV的变异演化及其分子机制 | 第19-20页 |
| 1.5 PRRSV的诊断与检测技术 | 第20-22页 |
| 1.5.1 血清学诊断方法 | 第20-21页 |
| 1.5.2 分子生物学诊断方法 | 第21-22页 |
| 1.6 猪繁殖与呼吸综合征疫苗 | 第22-25页 |
| 1.6.1 灭活疫苗 | 第22-23页 |
| 1.6.2 减毒活疫苗 | 第23页 |
| 1.6.3 DNA疫苗 | 第23-24页 |
| 1.6.4 亚单位疫苗 | 第24页 |
| 1.6.5 活载体疫苗 | 第24-25页 |
| 第二章 PRRSV分型PCR方法的建立 | 第25-34页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.2.1.1 病毒及细胞 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.2.1.3 培养基与抗生素的配制 | 第26-27页 |
| 2.2.1.4 主要设备 | 第27页 |
| 2.2.2 方法 | 第27-30页 |
| 2.2.2.1 区分PRRSV类NADC30、HP-PRRSV和经典毒株的RT-PCR引物设计 | 第27页 |
| 2.2.2.2 样品的准备 | 第27页 |
| 2.2.2.3 提取核酸 | 第27-28页 |
| 2.2.2.4 反转录 | 第28页 |
| 2.2.2.5 RT-PCR鉴别检测方法的建立及条件优化 | 第28-29页 |
| 2.2.2.6 PCR产物基因序列测序 | 第29-30页 |
| 2.2.2.7 PCR鉴别检测方法的特异性实验 | 第30页 |
| 2.2.2.8 RT-PCR鉴别检测方法的敏感性实验 | 第30页 |
| 2.2.2.9 区分PRRSV类NADC30、HP-PRRSV和经典毒株的RT-PCR临床样品检测结果 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.3.1 RT-PCR鉴别检测方法的反应体系优化结果 | 第30页 |
| 2.3.2 RT-PCR鉴别检测方法的PCR产物测序鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 RT-PCR鉴别检测方法的特异性实验结果 | 第31页 |
| 2.3.4 RT-PCR鉴别检测方法的敏感性试验结果 | 第31-32页 |
| 2.3.5 分型RT-PCR临床样品检测结果 | 第32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 2016-2017年河南省及周边部分地区PRRSV分子检测及nsp2、ORF5基因变异分析 | 第34-49页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 材料与方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 材料 | 第34-35页 |
| 3.2.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.2.1.3 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.2.2 方法 | 第35-37页 |
| 3.2.2.1 PCR引物 | 第35页 |
| 3.2.2.2 样品的准备 | 第35页 |
| 3.2.2.3 提取核酸 | 第35页 |
| 3.2.2.4 反转录 | 第35页 |
| 3.2.2.5 病原检测及GP5、nsp2基因扩增、克隆与序列测定 | 第35-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-47页 |
| 3.3.1 病原检测结果 | 第37-38页 |
| 3.3.2 nsp2及ORF5的扩增结果 | 第38页 |
| 3.3.3 nsp2基因的变异特征 | 第38-42页 |
| 3.3.4 ORF5基因的变异特征 | 第42-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 类NADC30毒株的分离与鉴定 | 第49-56页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 材料与方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 材料 | 第49-51页 |
| 4.2.1.1 病料的收集 | 第49-50页 |
| 4.2.1.2 细胞 | 第50页 |
| 4.2.1.3 主要试剂 | 第50页 |
| 4.2.1.4 主要仪器设备 | 第50-51页 |
| 4.2.2 方法 | 第51-53页 |
| 4.2.2.1 PCR引物的设计 | 第51页 |
| 4.2.2.2 样品的准备 | 第51页 |
| 4.2.2.3 PRRSV的分离与培养 | 第51-52页 |
| 4.2.2.4 PRRSV的分离病毒的检测 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-55页 |
| 4.3.1 PRRSV分离培养结果 | 第53-54页 |
| 4.3.2 PRRSV的分离病毒的检测 | 第54-55页 |
| 4.3.2.1 RT-PCR检测 | 第54页 |
| 4.3.2.2 IPMA鉴定 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 猪繁殖与呼吸综合征病毒类 NADC30 毒株全基因序列测定与分析 | 第56-65页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 材料和方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 材料 | 第56-57页 |
| 5.2.1.1 病毒样品 | 第56-57页 |
| 5.2.1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 5.2.2 方法 | 第57-59页 |
| 5.2.2.1 引物设计 | 第57-59页 |
| 5.2.2.2 分子生物学分析软件 | 第59页 |
| 5.2.2.3 RNA提取与PCR扩增、克隆及测序 | 第59页 |
| 5.2.2.4 全基因序列同源性分析 | 第59页 |
| 5.2.2.5 全基因序列遗传进化分析 | 第59页 |
| 5.2.2.6 序列重组分析 | 第59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-63页 |
| 5.3.1 全基因扩增 | 第59页 |
| 5.3.2 同源性分析 | 第59-60页 |
| 5.3.3 20株类NADC30毒株的全基因序列遗传进化分析 | 第60-61页 |
| 5.3.4 类NADC30毒株基因重组分析 | 第61-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63页 |
| 5.5 小结 | 第63-65页 |
| 第六章 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| Abstract | 第77-78页 |
