| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第11-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 冠状病毒概述 | 第14-15页 |
| 1.2 猪 δ 冠状病毒研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 PDCoV的起源与流行 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PDCoV的分离与致病性 | 第16-17页 |
| 1.2.3 PDCoV基因组结构特征 | 第17-18页 |
| 1.3 内切核糖核酸酶（Nendo U）研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 冠状病毒与天然免疫 | 第19-24页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-30页 |
| 3.1.1 细胞、毒株与菌株 | 第25页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第25-26页 |
| 3.1.3 工具酶及主要化学试剂 | 第26页 |
| 3.1.4 Western Blot及IFA实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.5 培养基及其配制 | 第27-28页 |
| 3.1.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第28-30页 |
| 3.1.7 主要实验仪器及设备 | 第30页 |
| 3.1.8 分子生物学及序列分析软件 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-41页 |
| 3.2.1 PDCoV的增殖 | 第30-31页 |
| 3.2.2 病毒/细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.3 c DNA的合成以及目的片段扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.4 限制性内切酶酶切反应 | 第32页 |
| 3.2.5 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第32页 |
| 3.2.6 PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第32-33页 |
| 3.2.7 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第33页 |
| 3.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第33页 |
| 3.2.9 连接产物的转化 | 第33-34页 |
| 3.2.10 重组质粒的制备与鉴定 | 第34页 |
| 3.2.11 原核和真核表达质粒构建 | 第34-35页 |
| 3.2.12 蛋白表达及纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.13 内切核糖核酸酶（Nendo U）活性测定 | 第36页 |
| 3.2.14 质粒的转染（脂质体介导的瞬时转染法） | 第36-37页 |
| 3.2.15 双荧光素酶报告基因检测 | 第37页 |
| 3.2.16 SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR | 第37-38页 |
| 3.2.17 Western blot、Co-IP、细胞核和细胞蛋白抽提实验 | 第38-40页 |
| 3.2.18 间接免疫荧光实验及激光共聚焦显微镜观察 | 第40页 |
| 3.2.19 统计学方法 | 第40-41页 |
| 第4章 结果与分析 | 第41-50页 |
| 4.1 PDCoV nsp15抑制Se V诱导的IFN-β 产生 | 第41-42页 |
| 4.2 PDCoV nsp15主要抑制NF-κB的活化 | 第42-44页 |
| 4.2.1 PDCoV nsp15抑制Se V诱导的NF-κB激活 | 第42页 |
| 4.2.2 PDCoV nsp15抑制Se V诱导的p65磷酸化和入核 | 第42-44页 |
| 4.3 PDCoV nsp15关键酶活位点的确定 | 第44-46页 |
| 4.3.1 冠状病毒Nendo U结构域氨基酸序列同源性分析 | 第44-45页 |
| 4.3.2 冠状病毒nsp15的Nendo U结构同源性分析 | 第45页 |
| 4.3.3 His219、His234和Lys269是PDCoV nsp15的关键酶活位点 | 第45-46页 |
| 4.4 PDCoV nsp15抑制IFN-β 的产生不依赖其内切酶活性 | 第46-50页 |
| 4.4.1 PDCoV nsp15突变体抑制Se V诱导的IFN-β 产生 | 第46-48页 |
| 4.4.2 PDCoV nsp15突变体抑制Se V诱导的NF-κB活化 | 第48-50页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第50-57页 |
| 5.1 讨论 | 第50-56页 |
| 5.1.1 PDCoV nsp15拮抗IFN-β 产生机制的初步研究 | 第50-52页 |
| 5.1.2 PDCoV nsp15内切核糖核酸酶活性分析 | 第52-53页 |
| 5.1.3 PDCoV nsp15拮抗IFN-β 产生不依赖其内切酶活性 | 第53-54页 |
| 5.1.4 PDCoV nsp15抑制Ⅰ型IFN信号转导机制的初步研究 | 第54-56页 |
| 5.2 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
