| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| abstract | 第9页 |
| 第一章 引言 | 第15-20页 |
| 1.1 秸秆类废弃物 | 第15-16页 |
| 1.2 植物秸秆饲料化 | 第16-17页 |
| 1.3 瘤胃酸中毒 | 第17-19页 |
| 1.4 乳酸氧化酶 | 第19-20页 |
| 第二章 乳酸氧化酶分泌菌株的筛选及基因的克隆 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.3 试剂与仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 乳酸利用菌的富集与分离 | 第22页 |
| 2.2.2 乳酸利用菌的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 乳酸氧化酶基因克隆 | 第23-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 乳酸利用菌的富集与分离 | 第24页 |
| 2.3.2 乳酸利用菌的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.3 乳酸氧化酶基因克隆 | 第25-27页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第27页 |
| 2.5 本章小结 | 第27-28页 |
| 第三章 乳酸氧化酶基因的高效异源表达 | 第28-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 3.1.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.2 主要培养基 | 第28-29页 |
| 3.1.3 主要试剂与仪器 | 第29-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 3.2.1 乳酸氧化酶大肠表达纯化方法 | 第30-31页 |
| 3.2.2 乳酸氧化酶酵母表达纯化方法 | 第31-33页 |
| 3.2.3 乳酸氧化酶的比活测定 | 第33-34页 |
| 3.2.4 酶活测定方法 | 第34页 |
| 3.2.5 添加核黄素对乳酸氧化酶酶活的影响 | 第34页 |
| 3.2.6 乳酸氧化酶酶学性质测定 | 第34-35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-42页 |
| 3.3.1 乳酸氧化酶大肠表达 | 第35-37页 |
| 3.3.2 乳酸氧化酶酵母表达 | 第37-40页 |
| 3.3.3 核黄素对乳酸氧化酶酶活的影响 | 第40页 |
| 3.3.4 乳酸氧化酶酶学性质测定 | 第40-42页 |
| 3.4 分析讨论 | 第42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第四章 乳酸氧化酶的热稳定性改造 | 第44-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-49页 |
| 4.1.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要培养基 | 第44页 |
| 4.1.3 试剂与仪器 | 第44-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 EgLOD同源模建 | 第49页 |
| 4.2.2 分子对接及结构分析 | 第49页 |
| 4.2.3 热稳定性突变设计 | 第49-50页 |
| 4.2.4 多序列比对 | 第50页 |
| 4.2.5 蛋白表面电荷分析 | 第50页 |
| 4.2.6 EgLOD突变体的构建 | 第50-51页 |
| 4.2.7 EgLOD及其突变体表达及纯化 | 第51页 |
| 4.2.8 EgLOD及其突变体的比活测定 | 第51-52页 |
| 4.2.9 EgLOD及其突变体的热稳定性测定 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-59页 |
| 4.3.1 EGLOG同源模建 | 第52页 |
| 4.3.2 EgLOD分子对接及结构分析 | 第52-53页 |
| 4.3.3 DS热稳定性突变设计 | 第53-56页 |
| 4.3.4 基于多序列比对结果的突变体实验 | 第56-57页 |
| 4.3.5 EgLOD蛋白表面电荷计算 | 第57-59页 |
| 4.4 分析讨论 | 第59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-61页 |
| 第五章 乳酸氧化酶对青贮秸秆中乳酸的降解 | 第61-66页 |
| 5.1 实验材料 | 第61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-62页 |
| 5.2.1 乳酸氧化酶对乳酸钠的转化效率 | 第61页 |
| 5.2.2 丙酮酸钠对乳酸氧化酶的抑制作用 | 第61-62页 |
| 5.2.3 乳酸氧化酶对青贮秸秆中乳酸含量的转化效率 | 第62页 |
| 5.3 实验结果 | 第62-65页 |
| 5.3.1 乳酸氧化酶对乳酸钠的转化率 | 第62-63页 |
| 5.3.2 丙酮酸钠对乳酸氧化酶的抑制作用 | 第63页 |
| 5.3.3 乳酸氧化酶对青贮秸秆中的乳酸含量的转化率 | 第63-65页 |
| 5.4 分析讨论 | 第65页 |
| 5.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第六章 结论与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第73-74页 |