| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 植物乙烯研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1.1 乙烯在植物中的作用 | 第12页 |
| 1.1.2 乙烯的生物合成 | 第12页 |
| 1.1.3 乙烯的生物合成受转录水平和转录后水平调控 | 第12-15页 |
| 1.1.4 植物激素调控乙烯的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.1.5 乙烯信号转导途径 | 第16-18页 |
| 1.1.6 乙烯与ABA的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.2 ABA信号转导 | 第19-21页 |
| 1.2.1 ABA信号转导途径 | 第19-21页 |
| 1.3 ABI4研究进展 | 第21-26页 |
| 1.3.1 ABI4的调控功能 | 第21-22页 |
| 1.3.2 ABI4的DNA结合特性 | 第22-24页 |
| 1.3.3 ABI4蛋白的降解 | 第24-26页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第27-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 实验使用的工具酶、试剂及化学药品 | 第27页 |
| 2.1.3 菌株及质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.4 引物 | 第28页 |
| 2.2 实验仪器 | 第28页 |
| 2.3 常用溶液及培养基的配制 | 第28-29页 |
| 2.3.1 常用溶液的配制 | 第28-29页 |
| 2.3.2 常用培养基配置 | 第29页 |
| 2.4 实验方法 | 第29-44页 |
| 2.4.1 培养基种植拟南芥 | 第29页 |
| 2.4.2 EMS诱变 | 第29-30页 |
| 2.4.3 图位克隆步骤 | 第30页 |
| 2.4.4 种子萌发实验 | 第30页 |
| 2.4.5 乙烯含量测定 | 第30页 |
| 2.4.6 测量下胚轴及根的长度 | 第30页 |
| 2.4.7 拟南芥植株杂交 | 第30-31页 |
| 2.4.8 拟南芥基因组DNA快速提取(图位克隆中用) | 第31页 |
| 2.4.9 拟南芥总DNA提取CTAB法 | 第31页 |
| 2.4.10 植物材料的处理 | 第31-32页 |
| 2.4.11 拟南芥RNA的提取 | 第32页 |
| 2.4.12 反转录合成cDNA第一条链 | 第32-33页 |
| 2.4.13 PCR反应 | 第33页 |
| 2.4.14 目的片段的凝胶回收 | 第33-34页 |
| 2.4.15 T载体连接 | 第34页 |
| 2.4.16 大肠杆菌热击感受态的制备及转化 | 第34-35页 |
| 2.4.17 菌液PCR鉴定阳性菌株 | 第35页 |
| 2.4.18 提取及鉴定重组质粒 | 第35-36页 |
| 2.4.19 构建植物过表达载体 | 第36-37页 |
| 2.4.20 土壤农杆菌(LBA4404)电击感受态的制备及转化 | 第37页 |
| 2.4.21 拟南芥转化 | 第37-38页 |
| 2.4.22 Real-time PCR检测基因表达 | 第38页 |
| 2.4.23 染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验 | 第38-41页 |
| 2.4.24 SDS-PAGE蛋白电泳检测 | 第41页 |
| 2.4.25 蛋白免疫印迹检测(Western Blotting) | 第41-42页 |
| 2.4.26 酵母菌株AH109热激转化感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.4.27 转化酵母感受态 | 第42-44页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第44-61页 |
| 3.1 抗ABA且乙烯含量变化的突变体筛选及图位克隆 | 第44-49页 |
| 3.1.1 突变体abi4-152抗ABA且乙烯释放量降低 | 第44-45页 |
| 3.1.2 图位克隆 | 第45-47页 |
| 3.1.3 ABI4的功能验证 | 第47页 |
| 3.1.4 ABI4-152的功能鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2 abi4等位突变体表型 | 第49-53页 |
| 3.2.1 突变体abi4-102,abi4-103和abi4-152萌发对ABA和盐不敏感 | 第49-50页 |
| 3.2.2 突变体abi4-102和abi4-103的乙烯释放量增加,乙烯信号增强;突变体abi4-152乙烯释放降低,乙烯信号减弱 | 第50-53页 |
| 3.3 ABI4抑制ACS4、ACS8及ACO2基因的表达 | 第53-54页 |
| 3.4 ABI4与ACS4、ACS8及ACO2基因的启动子相结合 | 第54-57页 |
| 3.5 C端16个氨基酸影响ABI4的稳定性 | 第57-61页 |
| 3.5.1 C端16个氨基酸影响ABI4的稳定性 | 第57页 |
| 3.5.2 ABI4的C端12个氨基酸影响蛋白稳定性 | 第57-60页 |
| 3.5.3 ABA、葡萄糖和MG132不能影响ABI4的蛋白稳定性 | 第60-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-67页 |
| 4.1 乙烯合成降低突变体 | 第61页 |
| 4.2 ABA抑制乙烯合成的机理 | 第61-62页 |
| 4.3 ABI4激活ABA响应基因的表达,抑制乙烯合成基因的表达 | 第62-63页 |
| 4.4 突变体abi4-152同时影响ABI4的激活功能和抑制功能 | 第63页 |
| 4.5 显性突变体abi4-152 | 第63-64页 |
| 4.6 转基因材料中检测ABI4蛋白 | 第64-65页 |
| 4.7 调控ABI4蛋白稳定性的区域及影响因子 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67页 |
| 5.1.1 ABI4负调控乙烯的合成 | 第67页 |
| 5.1.2 ABA通过ABI4抑制乙烯合成 | 第67页 |
| 5.1.3 ABI4的C端负调控ABI4蛋白的稳定性 | 第67页 |
| 5.2 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 个人简历 | 第83页 |
