| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 一、序言 | 第11-13页 |
| 二、材料与方法 | 第13-36页 |
| (一)材料 | 第13-18页 |
| 1.1 质粒和菌细胞系 | 第13页 |
| 1.2 细胞系 | 第13页 |
| 1.3 主要实验试剂与药品 | 第13-15页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第15-16页 |
| 1.5 实验耗材 | 第16页 |
| 1.6 引物序列 | 第16-18页 |
| (二)方法 | 第18-36页 |
| 1、小鼠胚胎干细胞的复苏、换液和传代及冻存 | 第18-19页 |
| 2、大肠杆菌感受态的制备 | 第19-21页 |
| 3、质粒载体的抽提 | 第21-22页 |
| 4、sgRNA设计及载体构建 | 第22-23页 |
| 5、小鼠ES细胞EED基因的条件性敲除 | 第23-28页 |
| 6、小鼠胚胎干细胞电转、筛选及挑选单克隆培养 | 第28-29页 |
| 7、小鼠胚胎干细胞基因组DNA制备及基因型鉴定 | 第29-30页 |
| 8、小鼠胚胎干细胞RNA抽提及逆转录 | 第30-31页 |
| 9、实时定量荧光PCR | 第31-32页 |
| 10、小鼠胚胎干细胞拟胚体(EB)分化实验 | 第32页 |
| 11、WesternBlot | 第32-34页 |
| 12、双荧光素酶实验(Luciferase) | 第34-35页 |
| 13、细胞免疫荧光染色 | 第35-36页 |
| 三、结果 | 第36-57页 |
| 第一部分 :小鼠ES细胞Tbx3基因序列DPF2调控位点研究 | 第36-49页 |
| 1、小鼠ES细胞DPF2基因敲除影响Tbx3基因的表达 | 第36页 |
| 2、CHIP-seq分析研究验证Tbx3基因增强子位点 | 第36-37页 |
| 3、小鼠ES细胞Tbx3基因Enhancer-2位点敲除 | 第37-41页 |
| 4、小鼠ES细胞Tbx3基因Enhancer-3-6位点敲除 | 第41-44页 |
| 5、小鼠ES细胞Tbx3基因Enhancer-7区域敲除实验 | 第44-48页 |
| 6、CHIP-seq分析验证小鼠ES细胞Tbx3基因序列DPF2调控位点 | 第48-49页 |
| 第二部分 :小鼠ES细胞Tbx3基因序列PRC2调控位点研究 | 第49-57页 |
| 1、小鼠ES细胞EED基因条件性敲除实验 | 第49-53页 |
| 2、小鼠ES细胞EED基因条件性敲除验证分析 | 第53-55页 |
| 3、CHIP-seq分析验证小鼠ES细胞Tbx3基因序列PRC2调控位点 | 第55-57页 |
| 四、讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 综述：多梳蛋白复合体(PcG蛋白)生物学功能研究进展 | 第62-71页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 研究生期间已发表和待发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
