| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语表 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 NMO是不同于MS的一种独立疾病实体 | 第16-19页 |
| 1.1.1 NMO的流行病学调查 | 第16页 |
| 1.1.2 NMO的遗传因素 | 第16页 |
| 1.1.3 临床特点 | 第16-17页 |
| 1.1.4 NMO-IgG的发现 | 第17-18页 |
| 1.1.5 NMO的发病机制 | 第18-19页 |
| 1.2 AQP4 的概述 | 第19-21页 |
| 实验材料与试剂 | 第21-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 抗AQP4 抗体阳性血清和阴性血清 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株、质粒、转染试剂及基因序列 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 试剂 | 第22-27页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 缓冲液的配制 | 第23-27页 |
| 实验方法 | 第27-41页 |
| 3.1 AQP4 胞外区的原核表达及应用 | 第27-36页 |
| 3.1.1 AQP4 胞外区基因的设计及寡核苷酸单链的合成 | 第27页 |
| 3.1.2 pUC18-AQP4 胞外区克隆载体的构建 | 第27-30页 |
| 3.1.3 pUC18-AQP4 胞外区克隆载体的鉴定 | 第30-32页 |
| 3.1.4 pET32a(+)-AQP4 胞外区表达载体的构建及鉴定 | 第32页 |
| 3.1.5 目的蛋白的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第32-33页 |
| 3.1.6 目的蛋白的纯化及亲和层析柱的再生及保存 | 第33-35页 |
| 3.1.7 纯化后蛋白的浓度测定 | 第35页 |
| 3.1.8 纯化后蛋白的SDS-PAGE电泳分析 | 第35页 |
| 3.1.9 纯化后蛋白的Western Blot鉴定 | 第35页 |
| 3.1.10 目的蛋白的柱上酶切及Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第35-36页 |
| 3.1.11 切割流穿液体进行ELISA检测 | 第36页 |
| 3.2 AQP4 全长的真核表达及应用 | 第36-41页 |
| 3.2.1 AQP4 b亚型全长基因的扩增 | 第36-38页 |
| 3.2.2 重组表达载体pCMV6-AC-GFP-AQP4 的构建及鉴定 | 第38页 |
| 3.2.3 HEK293 细胞的复苏与培养 | 第38-39页 |
| 3.2.4 细胞转染重组质粒pCMV6-AC-GFP-AQP4 | 第39页 |
| 3.2.5 转染细胞的固定和保存 | 第39页 |
| 3.2.6 免疫荧光法检测抗AQP4 抗体 | 第39-41页 |
| 结果 | 第41-52页 |
| 4.1 AQP43 个胞外区形成双链DNA后的鉴定 | 第41页 |
| 4.2 AQP43 个胞外区克隆质粒的鉴定 | 第41-43页 |
| 4.3 AQP43 个胞外区表达质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| 4.4 表达产物的鉴定 | 第44-46页 |
| 4.4.1 诱导表达蛋白的表达形式和诱导浓度 | 第44-45页 |
| 4.4.2 表达蛋白的最佳诱导时间 | 第45-46页 |
| 4.5 纯化产物的鉴定 | 第46-48页 |
| 4.5.1 SDS-PAGE分析 | 第46-48页 |
| 4.5.2 Western Blot分析 | 第48页 |
| 4.6 AQP4 胞外区蛋白纯化后酶切鉴定 | 第48页 |
| 4.7 AQP4 胞外区蛋白酶切流穿液ELISA鉴定 | 第48-49页 |
| 4.8 脑组织RNA及目的基因PCR扩增产物的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.9 重组质粒pCMV6-AC-GFP-AQP4 的酶切鉴定 | 第50页 |
| 4.10 AQP4-GFP的融合表达蛋白在HEK293 细胞中的定位 | 第50-51页 |
| 4.11 转染重组质粒pCMV6-AC-GFP-AQP4 与患者血清中AQP4 抗体的结合 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-56页 |
| 5.1 AQP4 的结构 | 第52-54页 |
| 5.2 荧光素标签的位置 | 第54页 |
| 5.3 原核表达蛋白的构象和蛋白的纯度 | 第54-55页 |
| 5.4 展望 | 第55-56页 |
| 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 综述 | 第60-78页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 个人简历 | 第79页 |
