| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略图 | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 马尾松 | 第11-12页 |
| 1.1.1 马尾松简介 | 第11页 |
| 1.1.2 马尾松生态与经济价值 | 第11页 |
| 1.1.3 马尾松遗传改良研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 植物根系与植物生长 | 第12-13页 |
| 1.3 生长素调控根系发育 | 第13-14页 |
| 1.4 生长素信号转导途径 | 第14-18页 |
| 1.4.1 SCFTIR1结构特点及其在生长素信号转导中的作用 | 第15-17页 |
| 1.4.2 AUX/IAA结构特点及其作用机制 | 第17-18页 |
| 1.5 TIR1基因及AUX/IAA基因家族研究现状 | 第18页 |
| 1.5.1 TIR1基因研究现状 | 第18页 |
| 1.5.2 AUX/IAA基因家族研究现状 | 第18页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 1.7 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 马尾松TIR1基因和AUX/IAA家族基因的克隆及分析 | 第21-37页 |
| 2.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 马尾松总RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 RNA纯化和cDNA第一条链的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.3 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因中间序列克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.3.1 中间序列的引物设计及PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第23-24页 |
| 2.2.3.3 中间片段扩增产物琼脂糖凝胶回收 | 第24页 |
| 2.2.3.4 中间片段与载体的连接与转化 | 第24页 |
| 2.2.3.5 PCR鉴定阳性克隆和测序 | 第24页 |
| 2.2.4 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因两端序列的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.4.1 5′RACE和 3′RACE引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.4.2 5′RACE和 3′RACE所用cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.2.4.3 利用 5′RACE和 3′RACE技术扩增PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因的两端序列。 | 第25页 |
| 2.2.5 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3开放阅读框ORF(Open Reading Frame)的克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.5.1 PmTIR1开放阅读框的克隆 | 第26页 |
| 2.2.5.2 PmIAA1开放阅读框的克隆 | 第26页 |
| 2.2.5.3 PmIAA2和PmIAA3开放阅读框的克隆 | 第26页 |
| 2.2.6 序列及生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.2.7 组织特异性表达分析 | 第26-28页 |
| 2.2.7.1 实时定量引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2.7.2 反转录cDNA合成 | 第27页 |
| 2.2.7.3 实时定量PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-35页 |
| 2.3.1 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.2 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因全长 | 第28-31页 |
| 2.3.2.1 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因中间序列 | 第28-29页 |
| 2.3.2.2 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因 5′和 3'端序列 | 第29-30页 |
| 2.3.2.3 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因cDNA编码区 | 第30-31页 |
| 2.3.3 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因及氨基酸序列分析 | 第31-35页 |
| 2.3.3.1 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因及氨基酸同源序列比对 | 第31页 |
| 2.3.3.2 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3蛋白一级结构及理化特性分析 | 第31-33页 |
| 2.3.3.3 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3蛋白二级结构预测 | 第33页 |
| 2.3.3.4 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3蛋白结构域分析 | 第33-34页 |
| 2.3.3.5 PmTIR1、PmIAA1、PmIAA2和PmIAA3基因组织特异性表达分析 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 PmTIR1基因真核表达初步分析 | 第37-48页 |
| 3.1 试验材料 | 第37页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 菌种和质粒 | 第37页 |
| 3.1.3 试剂和培养基 | 第37页 |
| 3.2 试验方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 PmTIR1开放阅读框克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.1.1 引物设计及PCR扩增 | 第37页 |
| 3.2.1.2 扩增产物琼脂糖凝胶电泳回收 | 第37页 |
| 3.2.1.3 扩增产物与克隆载体的连接与转化 | 第37页 |
| 3.2.1.4 PCR鉴定阳性克隆及测序 | 第37-38页 |
| 3.2.2 质粒提取 | 第38页 |
| 3.2.3 质粒酶切 | 第38页 |
| 3.2.4 表达载体构建 | 第38页 |
| 3.2.5 植物表达载体转入农杆菌 | 第38-39页 |
| 3.2.5.1 根癌农杆菌EHA105感受态制备 | 第38-39页 |
| 3.2.5.2 植物表达载体质粒提取 | 第39页 |
| 3.2.5.3 冻融法转入农杆菌 | 第39页 |
| 3.2.6 叶盘法转入烟草 | 第39-40页 |
| 3.2.6.1 外植体制备 | 第39页 |
| 3.2.6.2 侵染液制备 | 第39页 |
| 3.2.6.3 侵染 | 第39-40页 |
| 3.2.6.4 转烟草培养 | 第40页 |
| 3.2.7 转基因烟草检测 | 第40-41页 |
| 3.2.7.1 烟草基因组DNA提取 | 第40页 |
| 3.2.7.2 烟草基因组PCR | 第40页 |
| 3.2.7.3 目的片段电泳检测 | 第40页 |
| 3.2.7.4 烟草总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第40-41页 |
| 3.2.7.5 烟草PCR检测 | 第41页 |
| 3.2.7.6 目的片段电泳检测 | 第41页 |
| 3.2.7.7 转PmTIR1基因烟草实时定量检测 | 第41页 |
| 3.2.8 转基因烟草形态学观察 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.3.1 含有目的基因ORF序列的克隆载体PCR鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.3.2 质粒酶切 | 第42页 |
| 3.3.3 表达载体构建 | 第42-43页 |
| 3.3.4 植物表达载体转化农杆菌 | 第43页 |
| 3.3.5 烟草基因组特异性扩增PmTIR1基因 | 第43-44页 |
| 3.3.6 烟草RNA特异性扩增PmTIR1基因 | 第44页 |
| 3.3.7 转基因烟草实时定量检测 | 第44-45页 |
| 3.3.8 转基因烟草形态学观察结果 | 第45-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 结论与展望 | 第48-49页 |
| 4.1 结论 | 第48页 |
| 4.2 展望 | 第48-49页 |
| 附录 | 第49-54页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
