| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-21页 |
| 1.1 培育抗病毒番木瓜的研究进展 | 第8-14页 |
| 1.1.1 番木瓜概述 | 第8-10页 |
| 1.1.2 番木瓜环斑病毒 | 第10-12页 |
| 1.1.3 番木瓜畸形花叶病毒 | 第12页 |
| 1.1.4 番木瓜抗病毒研究策略及进展 | 第12-14页 |
| 1.2 基于CRISPR基因编辑系统的转基因抗病毒研究 | 第14页 |
| 1.3 Golden Gate载体构建技术 | 第14-16页 |
| 1.4 eIF4E互作因子 | 第16-17页 |
| 1.5 CRISPR基因编辑技术用于植物抗病毒育种 | 第17-19页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料和病毒株 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂与仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基和缓冲液配方等 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-38页 |
| 2.2.1 采样调查 | 第22页 |
| 2.2.2 植物总DNA和总RNA提取 | 第22-24页 |
| 2.2.3 机械摩擦接种PRSV和PLDMV | 第24页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的转化及质粒提取 | 第24-26页 |
| 2.2.5 农杆菌感受态细胞的转化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和胶回收 | 第27-28页 |
| 2.2.7 T/A克隆及测序与数据分析 | 第28-29页 |
| 2.2.8 抗PRSV的CRISPR/FnCas9基因编辑载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.9 番木瓜CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.10 ELISA检测病毒积累量 | 第32-34页 |
| 2.2.11 抗PRSV的CRISPR/FnCas9植物表达载体瞬时表达验证 | 第34页 |
| 2.2.12 RT-PCR检测病毒 | 第34-35页 |
| 2.2.13 番木瓜遗传转化 | 第35-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-60页 |
| 3.1 环岛采样结果 | 第38-40页 |
| 3.2 抗PRSV的CRISPR/FnCas9基因编辑载体的分子验证 | 第40-49页 |
| 3.2.1 PRSV保守区域分析及sgRNA设计 | 第40-42页 |
| 3.2.2 PCR扩增sgRNA结果 | 第42-43页 |
| 3.2.3 抗PRSV的CRISPR/FnCas9基因编辑载体的中间改造模块载体验证 | 第43-45页 |
| 3.2.4 抗PRSV的CRISPR/FnCas9基因编辑载体的最终植物转化载体验证 | 第45-49页 |
| 3.3 番木瓜CRISPR/Cas9基因编辑载体的分子验证 | 第49-54页 |
| 3.3.1 eIF4E分析和sgRNA设计 | 第49-50页 |
| 3.3.2 番木瓜CRISPR/Cas9基因编辑载体的中间改造模块载体验证 | 第50-52页 |
| 3.3.3 番木瓜CRISPR/Cas9基因编辑载体的最终植物转化载体验证 | 第52-54页 |
| 3.4 抗PRSV的CRISPR/FnCas9基因编辑载体的瞬时表达验证结果 | 第54-58页 |
| 3.5 番木瓜遗传转化工作进展 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录一主要试剂配制 | 第71-73页 |
| 附录二项目来源及论文发表情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
