| 摘要 | 第3-4页 |
| Summary | 第4-5页 |
| 缩略词与符号英汉对照文表 | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1 国内外研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1 禽呼肠孤病毒简介 | 第12页 |
| 1.2 先天性免疫系统简介 | 第12-13页 |
| 1.3 RIG-I样受体介导的信号通路 | 第13-16页 |
| 1.3.1 RLR家族 | 第14页 |
| 1.3.2 RLR对病毒影响的研究 | 第14页 |
| 1.3.3 RLR介导的信号传导 | 第14-16页 |
| 1.4 干扰素简介 | 第16-17页 |
| 1.4.1 干扰素家族成员 | 第16页 |
| 1.4.2 病毒激活I型IFN基因的调控 | 第16页 |
| 1.4.3 I型IFN诱导的信号通路转导 | 第16-17页 |
| 1.5 鸭呼肠孤病毒天然免疫研究现状 | 第17-18页 |
| 2 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 鸭RIG-I基因的克隆及序列分析 | 第19-25页 |
| 1 材料与方法 | 第19-20页 |
| 1.1 材料 | 第19页 |
| 1.1.1 动物材料 | 第19页 |
| 1.1.2 病毒 | 第19页 |
| 1.1.3 载体，试剂及主要仪器 | 第19页 |
| 1.2 方法 | 第19-20页 |
| 1.2.1 组织RNA提取（Trizol法）及反转录 | 第19页 |
| 1.2.2 鸭RIG-I ORF和CARD区扩增及真核表达质粒构建 | 第19-20页 |
| 1.2.2.1 引物设计 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 鸭体内中RIG-I的初步鉴定及相关细胞因子检测： | 第20页 |
| 1.2.2.3 鸭RIG-I全长基因扩增及真核表达质粒构建 | 第20页 |
| 1.2.2.4 鸭RIG-I CARD基因扩增及真核表达质粒的构建 | 第20页 |
| 1.2.2.5 鸭RIG-I全基因序列比对分析 | 第20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-24页 |
| 2.1 鸭体内中RIG-I的初步鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2 鸭RIG-I全长基因及其CARD基因扩增结果 | 第21页 |
| 2.3 鸭RIG-I ORF及CARD区真核表达质粒的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.4 鸭RIG-I全长基因序列分析 | 第22-24页 |
| 2.4.1 鸭RIG-I全长基因序列比对与遗传进化分析 | 第22-23页 |
| 2.4.2 鸭RIG-I全长基因保守区及二级结构分析 | 第23页 |
| 2.4.3 鸭RIG-I的亲水性、柔韧性、表面可能性、抗原指数和B细胞抗原表位预测 | 第23-24页 |
| 3 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 鸭RIG-I及DRV荧光定量PCR检测方法的建立 | 第25-28页 |
| 1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 1.1 材料 | 第25页 |
| 1.1.1 质粒标准品 | 第25页 |
| 1.1.2 载体，试剂及主要仪器 | 第25页 |
| 1.2 方法 | 第25-26页 |
| 1.2.1 质粒标准品的定量 | 第25页 |
| 1.2.2 标准曲线的建立 | 第25-26页 |
| 1.2.2.1 鸭RIG-I基因荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第25页 |
| 1.2.2.2 鸭DRV荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第25-26页 |
| 2 结果 | 第26-27页 |
| 2.1 标准品质粒的定量 | 第26页 |
| 2.2 标准曲线的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.1 鸭RIG-I基因荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第26-27页 |
| 2.2.2 鸭DRV荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第27页 |
| 3 讨论 | 第27-28页 |
| 第四章 外源性鸭RIG-I抗DRV感染功能检测 | 第28-34页 |
| 1 材料与方法 | 第28-30页 |
| 1.1 材料 | 第28页 |
| 1.1.1 毒株，细胞和质粒 | 第28页 |
| 1.1.2 载体，试剂及主要仪器 | 第28页 |
| 1.2 方法 | 第28-30页 |
| 1.2.1 DEF的制备 | 第28页 |
| 1.2.2 质粒的定量 | 第28-29页 |
| 1.2.3 质粒的转染 | 第29页 |
| 1.2.4 病毒感染 | 第29页 |
| 1.2.5 病毒感染力的滴定（TCID50的测定） | 第29页 |
| 1.2.6 Trizol法提取RNA实时定量PCR | 第29-30页 |
| 2 结果 | 第30-32页 |
| 2.1 Real-time PCR引物优化 | 第30-31页 |
| 2.2 过表达鸭RIG-I对DRV复制的影响 | 第31页 |
| 2.3 外源表达鸭RIG-I至DF-1 对DRV复制的影响 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第五章 内源性鸭RIG-I抗DRV感染功能检测 | 第34-39页 |
| 1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 1.1 材料 | 第34页 |
| 1.1.1 动物材料 | 第34页 |
| 1.1.2 病毒 | 第34页 |
| 1.1.3 载体，试剂及主要仪器 | 第34页 |
| 1.2 方法 | 第34-35页 |
| 1.2.1 DEF的制备 | 第34页 |
| 1.2.2 DRV病毒感染DEF | 第34页 |
| 1.2.3 TRIZOL法提取RNA及实时定量PCR | 第34-35页 |
| 1.2.4 Western blot检测DRV | 第35页 |
| 1.2.5 动物试验 | 第35页 |
| 1.2.5.1 分组及攻毒 | 第35页 |
| 1.2.5.2 组织采集及RIG-I mRNA、duIFN-α mRNA、duMx mRNA检测 | 第35页 |
| 1.2.5.3 鸭脾和肾中病毒拷贝数的测定 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-38页 |
| 2.1 DEF感染DRV后duRIG-I、IFN-α、Mx mRNA检测 | 第35-36页 |
| 2.2 DEF感染DRV后病毒滴度检测 | 第36页 |
| 2.3 Western blot检测DRV | 第36-37页 |
| 2.4 RIG-I在正常鸭体内的分布 | 第37页 |
| 2.5 鸭感染DRV后脾，肾组织中的duRIG-I mRNA，duIFN-α mRNA，duMx mRNA上调 | 第37页 |
| 2.6 脾，肾组织中病毒拷贝数检测 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 作者简介 | 第46-47页 |
| 第一导师简介 | 第47-48页 |
| 第二导师简介 | 第48-49页 |
