| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 餐厨垃圾的概况 | 第9页 |
| 1.2 现有的餐厨垃圾资源化技术 | 第9-12页 |
| 1.2.1 餐厨垃圾厌氧发酵 | 第10页 |
| 1.2.2 餐厨好氧堆肥 | 第10-11页 |
| 1.2.3 餐厨垃圾生产乙醇与丁醇 | 第11页 |
| 1.2.4 餐厨垃圾生产生物柴油 | 第11-12页 |
| 1.2.5 餐厨垃圾生产一些其他高价值产品 | 第12页 |
| 1.3 乳酸的概述 | 第12-14页 |
| 1.3.1 乳酸的运用 | 第12-13页 |
| 1.3.2 乳酸用于合成高分子材料 | 第13页 |
| 1.3.3 利用废弃物生产乳酸 | 第13-14页 |
| 1.4 淀粉水解酶 | 第14-15页 |
| 1.5 毕赤酵母 | 第15-16页 |
| 1.5.1 毕赤酵母表达系统 | 第15-16页 |
| 1.6 研究目的、意义及内容 | 第16-18页 |
| 1.6.1 研究目的及意义 | 第16页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 淀粉酶、糖化酶、乳酸脱氢酶单表达载体的构建及在毕赤酵母中表达 | 第18-67页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 材料 | 第18-22页 |
| 2.2.1 实验菌株和质粒 | 第18-19页 |
| 2.2.2 培养基 | 第19页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.5 需配试剂 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-50页 |
| 2.3.1 毕赤酵母基因组提取 | 第22-23页 |
| 2.3.2 凝结芽孢杆菌基因组提取 | 第23页 |
| 2.3.3 毕赤酵母强启动子pTEF克隆 | 第23-27页 |
| 2.3.4 淀粉酶基因的克隆 | 第27-30页 |
| 2.3.5 糖化酶基因的克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.6 凝结芽孢杆菌乳酸脱氢酶的克隆 | 第31-33页 |
| 2.3.7 表达载体pTEFZ的构建 | 第33-35页 |
| 2.3.8 乳酸脱氢酶LDH表达载体pTEFZ-LDH的构建 | 第35-38页 |
| 2.3.9 淀粉酶Amy表达载体pGAPZ-Amy的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.10 糖化酶Ga表达载体pGAPZ-Ga的构建 | 第40-42页 |
| 2.3.11 表达载体pGAPZ-Amy,pGAPZ-Ga,pTEFZ-LDH电击转化毕赤酵母 | 第42-43页 |
| 2.3.12 重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第43-47页 |
| 2.3.13 淀粉酶、糖化酶重组酵母酶活曲线及生长曲线 | 第47-49页 |
| 2.3.14 乳酸脱氢酶重组酵母发酵葡萄糖实验 | 第49-50页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第50-65页 |
| 2.4.1 毕赤酵母强启动子pTEF克隆 | 第50-51页 |
| 2.4.2 淀粉酶基因克隆 | 第51-52页 |
| 2.4.3 糖化酶基因克隆 | 第52-53页 |
| 2.4.4 凝结芽孢杆菌乳酸脱氢酶克隆 | 第53-54页 |
| 2.4.5 重组毕赤酵母pldh构建 | 第54-56页 |
| 2.4.6 重组毕赤酵母pamy构建 | 第56-57页 |
| 2.4.7 重组毕赤酵母pga构建 | 第57-58页 |
| 2.4.8 毕赤酵母pamy、毕赤酵母pga淀粉水解圈 | 第58-59页 |
| 2.4.9 重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第59-60页 |
| 2.4.10 重组蛋白的活性电泳分析 | 第60-62页 |
| 2.4.11 pamy菌株生长曲线和酶活曲线 | 第62-63页 |
| 2.4.12 pga菌株生长曲线以及酶活曲线 | 第63-64页 |
| 2.4.13 pldh菌株发酵葡萄糖生产乳酸 | 第64-65页 |
| 2.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 第三章 α-淀粉酶、糖化酶和乳酸脱氢酶共表达重组毕赤酵母构建 | 第67-81页 |
| 3.1 引言 | 第67页 |
| 3.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 3.2.1 实验菌株和质粒 | 第67页 |
| 3.2.2 培养基 | 第67页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第67页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第67页 |
| 3.2.5 需配试剂 | 第67-68页 |
| 3.3 实验方法 | 第68-73页 |
| 3.3.1 pTEFZ-AGL表达载体的构建 | 第68-71页 |
| 3.3.2 pTEFZ-AGL转化毕赤酵母X- | 第71页 |
| 3.3.3 重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第71页 |
| 3.3.4 重组毕赤酵母淀粉酶酶活曲线以及生长曲线 | 第71-73页 |
| 3.3.5 毕赤酵母pTEFZ-AGL发酵淀粉产乳酸实验 | 第73页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第73-79页 |
| 3.4.1 重组质粒pTEFZ-AL的构建 | 第73-74页 |
| 3.4.2 重组质粒pTEFZ-AGL的构建 | 第74-75页 |
| 3.4.3 重组质粒pTEFZ-AGL转化毕赤酵母x- | 第75页 |
| 3.4.4 pagl菌株淀粉水解圈 | 第75-76页 |
| 3.4.5 重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第76页 |
| 3.4.6 重组蛋白活性电泳分析 | 第76-77页 |
| 3.4.7 pagl生长曲线和酶活曲线 | 第77-78页 |
| 3.4.8 毕赤酵母pagl发酵淀粉产乳酸实验 | 第78-79页 |
| 3.5 本章小结 | 第79-81页 |
| 第四章 三基因共表达菌株发酵餐厨垃圾生产乳酸 | 第81-89页 |
| 4.1 引言 | 第81页 |
| 4.2 材料 | 第81-82页 |
| 4.2.1 实验菌株和材料 | 第81页 |
| 4.2.2 培养基 | 第81页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第81页 |
| 4.2.4 需配试剂 | 第81-82页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第82页 |
| 4.3 实验方法 | 第82-85页 |
| 4.3.1 餐厨垃圾主要成分测定 | 第82-84页 |
| 4.3.2 重组毕赤酵母发酵餐厨垃圾产乳酸情况 | 第84-85页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第85-87页 |
| 4.4.1 餐厨垃圾主要成分测定结果 | 第85页 |
| 4.4.2 重组毕赤酵母发酵餐厨垃圾生产乳酸 | 第85-87页 |
| 4.5 本章小结 | 第87-89页 |
| 第五章 全文总结及展望 | 第89-91页 |
| 5.1 全文总结 | 第89-90页 |
| 5.2 展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 附录一 引物序列 | 第100-101页 |
| 附录二 基因序列 | 第101-104页 |
| 附录三 英文缩写 | 第104-105页 |
| 在校期间发表论文 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
