| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 树突状细胞的生物学特征 | 第12-13页 |
| 1.1.1 树突状细胞的分类与分布 | 第12页 |
| 1.1.2 树突状细胞抗原摄取与提呈功能 | 第12-13页 |
| 1.1.3 树突状细胞在T细胞分化发育中的作用 | 第13页 |
| 1.2 灵芝多糖对DCs的调控作用 | 第13-14页 |
| 1.3 高通量测序技术 | 第14-16页 |
| 1.3.1 高通量测序技术及其应用 | 第14-15页 |
| 1.3.2 RNA-seq及其优势 | 第15页 |
| 1.3.3 RNA-seq在国内外研究的现状 | 第15-16页 |
| 1.4 本文研究的目的意义和主要内容 | 第16-18页 |
| 1.4.1 目的意义 | 第16-17页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第2章 黑灵芝多糖对树突状细胞的免疫调节作用研究 | 第18-30页 |
| 2.1 引言 | 第18-19页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-22页 |
| 2.3.1 DCs前体细胞的获取与DCs诱导 | 第20-21页 |
| 2.3.2 流式细胞术检测DCs细胞表型 | 第21页 |
| 2.3.3 ELISA检测细胞因子表达 | 第21页 |
| 2.3.4 混合淋巴细胞反应(MLR) | 第21-22页 |
| 2.3.5 Westernblotting | 第22页 |
| 2.3.6 数据处理 | 第22页 |
| 2.4 结果与分析 | 第22-28页 |
| 2.4.1 黑灵芝多糖对DCs表面分子表达的影响 | 第22-23页 |
| 2.4.2 黑灵芝多糖对DCs细胞因子和趋化因子的表达影响 | 第23-24页 |
| 2.4.3 黑灵芝多糖对DCs刺激T细胞增殖的影响 | 第24-25页 |
| 2.4.4 MAPK信号通路抑制剂对黑灵芝多糖诱导DCs表面分子表达的影响 | 第25-26页 |
| 2.4.5 MAPK信号通路抑制剂对黑灵芝多糖诱导DCs细胞因子表达的影响 | 第26-27页 |
| 2.4.6 黑灵芝多糖对DCsMAPK信号通路关键蛋白表达的影响 | 第27-28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章 基于RNA-seq研究黑灵芝多糖对树突状细胞的免疫调节作用机制 | 第30-65页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第30-31页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第30-31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-39页 |
| 3.3.1 免疫磁珠法纯化DCs | 第31页 |
| 3.3.2 样品获取 | 第31页 |
| 3.3.3 总RNA提取及质量检测 | 第31-32页 |
| 3.3.4 转录组测序 | 第32-33页 |
| 3.3.5 转录组数据质控和分析 | 第33-34页 |
| 3.3.6 原始数据的整理、过滤及质量评估 | 第34-35页 |
| 3.3.7 比对到基因组 | 第35页 |
| 3.3.8 基因表达量分析 | 第35-36页 |
| 3.3.9 RT-qPCR验证部分差异表达基因 | 第36-38页 |
| 3.3.10 流式细胞术检测DCs细胞表型 | 第38-39页 |
| 3.3.11 ELISA检测细胞因子表达 | 第39页 |
| 3.3.12 Westernblotting | 第39页 |
| 3.3.13 数据处理 | 第39页 |
| 3.4 结果与分析 | 第39-62页 |
| 3.4.1 总RNA质量检测 | 第39-40页 |
| 3.4.2 数据整理和过滤 | 第40-41页 |
| 3.4.3 数据质控 | 第41-43页 |
| 3.4.4 比对分析 | 第43-45页 |
| 3.4.5 基于表达量的测序质量评估 | 第45-48页 |
| 3.4.6 基因表达差异分析 | 第48-50页 |
| 3.4.7 差异表达基因的功能富集分析 | 第50-59页 |
| 3.4.8 部分NF-κB和PI3K/Akt信号通路相关差异表达基因验证 | 第59-60页 |
| 3.4.9 NF-κB和PI3K/Akt信号通路抑制剂对黑灵芝多糖诱导DCs表面分子表达的影响 | 第60-61页 |
| 3.4.10 NF-κB和PI3K/Akt信号通路抑制剂对黑灵芝多糖诱导DCs细胞因子表达的影响 | 第61页 |
| 3.4.11 黑灵芝多糖对DCsNF-κB和PI3K/Akt信号通路关键蛋白表达的影响 | 第61-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-65页 |
| 3.5.1 转录组学测序质量评估 | 第62页 |
| 3.5.2 转录组学差异基因GO功能注释分析 | 第62-63页 |
| 3.5.3 转录组学差异基因KEGGpathway的富集分析 | 第63页 |
| 3.5.4 PSG-1调节DCsNF-κB和PI3K/Akt信号通路 | 第63-65页 |
| 第4章 基于细胞共培养模型初探黑灵芝多糖对树突状细胞的间接调节作用 | 第65-71页 |
| 4.1 引言 | 第65页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第65-66页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第65页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第65-66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-68页 |
| 4.3.1 Caco-2单层细胞模型的建立 | 第66页 |
| 4.3.2 Caco-2单层膜模型TEER值的检测 | 第66-67页 |
| 4.3.3 Caco-2-DCs共培养模型的建立 | 第67页 |
| 4.3.4 流式细胞术检测DCs细胞表型 | 第67页 |
| 4.3.5 细胞因子检测 | 第67页 |
| 4.3.6 数据处理 | 第67-68页 |
| 4.4 结果与分析 | 第68-70页 |
| 4.4.1 黑灵芝多糖对Caco-2-DCs共培养模型TEER值的影响 | 第68页 |
| 4.4.2 黑灵芝多糖对DCs表面分子表达的间接影响 | 第68-69页 |
| 4.4.3 黑灵芝多糖对DCs细胞因子分泌的间接影响 | 第69-70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-71页 |
| 第5章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 本研究的主要结论 | 第71-72页 |
| 5.2 本研究的主要创新点 | 第72页 |
| 5.3 进一步的研究方向 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第81页 |
