| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 负链RNA病毒的反向遗传学 | 第14页 |
| 1.2 不分节段的单股负链RNA病毒作为疫苗载体 | 第14-17页 |
| 1.2.1 人副流感病毒 | 第15-16页 |
| 1.2.2 新城疫病毒 | 第16-17页 |
| 1.3 犬副流感概况 | 第17-20页 |
| 1.3.1 犬副流感病毒 | 第17-18页 |
| 1.3.2 犬副流感疫苗的现状 | 第18-19页 |
| 1.3.3 犬副流感病毒反向遗传技术的发展及作为疫苗载体的优势 | 第19-20页 |
| 1.4 狂犬病概况 | 第20-23页 |
| 1.4.1 狂犬病病毒 | 第20-21页 |
| 1.4.2 狂犬病疫苗现状 | 第21-23页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 犬副流感病毒NL/CPI/5株全基因组测序及序列分析 | 第24-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 病毒株 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 仪器 | 第25页 |
| 2.1.5 引物设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 NL/CPI/5病毒总RNA提取与反转录 | 第26-27页 |
| 2.2.2 NL/CPI/5基因各片段PCR | 第27页 |
| 2.2.3 PCR扩增产物的回收 | 第27页 |
| 2.2.4 DH5α化学感受态细胞的制作 | 第27-28页 |
| 2.2.5 连接转化 | 第28页 |
| 2.2.6 质粒的抽提 | 第28页 |
| 2.2.7 阳性质粒鉴定与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.8 NL/CPI/5全基因组测序结果拼接与分析 | 第29页 |
| 2.2.9 NL/CPI/5F和HN蛋白生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-36页 |
| 2.3.1 NL/CPI/5全基因组cDNA序列拼接 | 第29-30页 |
| 2.3.2 NL/CPI/5全基因组cDNA序列结构分析及其同源性分析 | 第30-32页 |
| 2.3.3 NL/CPI/5编码结构蛋白F和HN生物信息学分析 | 第32-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-41页 |
| 3 NL/CPI/5弱毒疫苗株基因组全长cDNA克隆质粒的构建 | 第41-48页 |
| 3.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 病毒株 | 第41页 |
| 3.1.2 质粒 | 第41-42页 |
| 3.1.3 试剂 | 第42页 |
| 3.1.4 仪器 | 第42页 |
| 3.1.5 引物设计与合成 | 第42页 |
| 3.2 试验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 犬副流感NL/CPI/5株基因组全长cDNA克隆的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.2 辅助质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3 结果 | 第45-46页 |
| 3.3.1 全长cDNA克隆构建分段及辅助基因PCR扩增结果 | 第45页 |
| 3.3.2 全长cDNA克隆构建质粒及辅助质粒酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 3.5 小结 | 第47-48页 |
| 4 包含外源基因的重组CPIVNL/CPI/5株基因组全长cDNA的构建 | 第48-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 引物设计 | 第48页 |
| 4.2 试验方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 重组CPIVNL/CPI/5株基因组全长cDNA表达外源基因的构建策略 | 第48-49页 |
| 4.2.2 PCR | 第49页 |
| 4.2.3 重组质粒的构建及鉴定 | 第49页 |
| 4.3 结果 | 第49-51页 |
| 4.3.1 外源基因PCR扩增结果 | 第49页 |
| 4.3.2 表达外源基因的重组CPIVNL/CPI/5株基因组全长cDNA的酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3.3 讨论 | 第50-51页 |
| 4.4 小结 | 第51-52页 |
| 5 重组CPIVNL/CPI/5疫苗株的探索性拯救 | 第52-56页 |
| 5.1 试验材料 | 第52页 |
| 5.1.1 细胞 | 第52页 |
| 5.1.2 质粒 | 第52页 |
| 5.1.3 试剂 | 第52页 |
| 5.1.4 仪器 | 第52页 |
| 5.2 方法 | 第52-54页 |
| 5.2.1 测定质粒浓度 | 第52-53页 |
| 5.2.2 细胞传代培养 | 第53页 |
| 5.2.3 磷酸钙转染 | 第53-54页 |
| 5.3 结果 | 第54-55页 |
| 5.3.1 转染各质粒浓度 | 第54页 |
| 5.3.2 病毒拯救结果 | 第54-55页 |
| 5.4 讨论 | 第55页 |
| 5.5 小结 | 第55-56页 |
| 6 全文结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
