| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩写对照表 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-22页 |
| 1 PCV2的概述 | 第13-17页 |
| 1.1 PCV2的主要蛋白及功能 | 第13-14页 |
| 1.1.1 Rep蛋白 | 第13页 |
| 1.1.2 Cap蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2 PCV2疫苗的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 灭活疫苗 | 第15页 |
| 1.2.2 弱毒疫苗 | 第15-16页 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 | 第16页 |
| 1.2.4 活载体疫苗 | 第16-17页 |
| 2 FMDV的概述 | 第17-20页 |
| 2.1 FMDV的结构蛋白质及功能 | 第17-18页 |
| 2.2 FMDV疫苗的研究进展 | 第18-20页 |
| 2.2.1 灭活疫苗 | 第18页 |
| 2.2.2 弱毒疫苗 | 第18-19页 |
| 2.2.3 亚单位疫苗 | 第19页 |
| 2.2.4 活载体疫苗 | 第19-20页 |
| 3 CD40L在增强免疫效果方面的研究进展 | 第20页 |
| 4 杆状病毒表面展示系统 | 第20-22页 |
| 4.1 杆状病毒的结构与特点 | 第20-21页 |
| 4.2 杆状病毒在基因工程疫苗研究中的应用 | 第21-22页 |
| 第二章 研究方案设计 | 第22-24页 |
| 1 研究的目的及意义 | 第22页 |
| 2 研究内容 | 第22-23页 |
| 3 技术路线 | 第23-24页 |
| 第三章 PCV2Cap、FMDVVP1和CD40L重组杆状病毒的构建及表达鉴定 | 第24-39页 |
| 1 材料与试剂 | 第24-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要仪器及耗材 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-32页 |
| 2.1 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第25-29页 |
| 2.2 利用Bac-to-Bac系统构建重组Bacmid | 第29页 |
| 2.2.1 制备AcBacmid/DH10Bac感受态细胞 | 第29页 |
| 2.2.2 重组AcBacmid的制备 | 第29页 |
| 2.3 重组杆状病毒的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.1 重组Bacmid转染Sf9细胞 | 第29-30页 |
| 2.3.2 重组病毒的获取 | 第30页 |
| 2.4 重组杆状病毒的滴度测定 | 第30页 |
| 2.5 融合蛋白在Sf9细胞中的表达鉴定 | 第30-32页 |
| 2.5.1 SDS-PAGE电泳分析 | 第30-31页 |
| 2.5.2 重组杆状病毒表达蛋白的WB分析 | 第31-32页 |
| 2.6 融合蛋白在细胞膜表面的间接免疫荧光检测 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-39页 |
| 3.1 重组转移载体的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2 3种重组Bacmid的交叉PCR验证 | 第33-34页 |
| 3.3 Sf9细胞病变及荧光鉴定 | 第34-35页 |
| 3.4 融合蛋白在Sf9细胞中的表达的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 3.5 3种融合蛋白表达的WB分析 | 第36-37页 |
| 3.6 融合蛋白在Sf9细胞膜表面的定位分析 | 第37-39页 |
| 第四章 重组杆状病毒rvAc-Cap、rvAc-VP1和rvAc-Cap-VP1的鉴定及免疫原性分析 | 第39-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第39页 |
| 1.1 实验材料 | 第39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 1.3 主要仪器及耗材 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-43页 |
| 2.1 融合蛋白质在重组杆状病毒表面展示的检测 | 第39-40页 |
| 2.2 免疫原的制备 | 第40页 |
| 2.3 小鼠皮下注射免疫试验 | 第40-42页 |
| 2.3.1 Cap及VP1特异性抗体检测 | 第41页 |
| 2.3.2 IL-4细胞因子检测 | 第41-42页 |
| 2.4 小鼠雾化免疫试验 | 第42-43页 |
| 2.4.1 Cap及VP1特异性抗体检测 | 第42页 |
| 2.4.2 IL-4细胞因子检测 | 第42-43页 |
| 2.5 数据的处理与分析 | 第43页 |
| 3 结果分析 | 第43-50页 |
| 3.1 重组杆状病毒的免疫透射电镜分析 | 第43页 |
| 3.2 注射免疫效果检测 | 第43-46页 |
| 3.2.1 Cap特异性抗体检测 | 第43-44页 |
| 3.2.2 VP1特异性抗体检测 | 第44-45页 |
| 3.2.3 IL-4细胞因子检测 | 第45-46页 |
| 3.3 雾化免疫效果检测 | 第46-50页 |
| 3.3.1 Cap特异性抗体检测 | 第46-47页 |
| 3.3.2 VP1特异性抗体检测 | 第47-48页 |
| 3.3.3 IL-4细胞因子检测 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
