| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-7页 |
| 引言 | 第7-15页 |
| 1. 基因组DNA甲基化的研究进展 | 第7-11页 |
| ·DNA甲基化概述 | 第7-8页 |
| ·DNA甲基化的生物学功能 | 第8-10页 |
| ·DNA甲基化的发生和维持机制 | 第10-11页 |
| 2. 酶活性的相关研究进展 | 第11-13页 |
| ·甲基化DNA的一般鉴定方法 | 第11-12页 |
| ·DNA甲基转移酶活性鉴定的相关研究 | 第12-13页 |
| 3. 本研究的背景、目的和意义 | 第13-15页 |
| 材料与方法 | 第15-24页 |
| 1. 实验材料 | 第15页 |
| ·载体和菌种和基因序列 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| 2. 实验方法 | 第15-24页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第15-16页 |
| ·目的片段连入pMD18-T载体 | 第16页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第16-17页 |
| ·阳性克隆的鉴定及测序 | 第17页 |
| ·pET-28a质粒及重组质粒的限制性内切酶酶切并跑胶回收 | 第17-18页 |
| ·酶切回收产物的连接转化 | 第18页 |
| ·将表达载体转入表达菌株BL21(DE3) | 第18-19页 |
| ·筛选合适的IPTG诱导浓度和时间 | 第19-20页 |
| ·用亲和层析的方法纯化目标蛋白并用脱盐柱除去小分子杂质 | 第20-22页 |
| ·蛋白产物的活性鉴定 | 第22-24页 |
| 结果与分析 | 第24-32页 |
| 1. 限制性内切酶的选择和LATaq扩增目标片段 | 第24-25页 |
| 2. 表达载体构建结果 | 第25-27页 |
| 3. 目的基因在在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第27-28页 |
| 4. 目的基因编码产物的分离纯化结果 | 第28-29页 |
| 5. 用甲基化敏感的限制性酶切酶酶切法体外检测表达产物活性 | 第29-32页 |
| 讨论 | 第32-33页 |
| 结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 致谢 | 第38页 |
