| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1. 玉米赤霉烯酮研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1 玉米赤霉烯酮简介 | 第13页 |
| 1.2 玉米赤霉烯酮的污染现状 | 第13-14页 |
| 1.3 玉米赤霉烯酮的代谢及生殖毒性 | 第14-15页 |
| 1.3.1 玉米赤霉烯酮的代谢 | 第14-15页 |
| 1.3.2 玉米赤霉烯酮的生殖毒性 | 第15页 |
| 2. 睾丸支持细胞的功能概况 | 第15页 |
| 3. 玉米赤霉烯酮与细胞凋亡 | 第15-17页 |
| 3.1 细胞凋亡 | 第15-17页 |
| 3.2 玉米赤霉烯酮诱导细胞凋亡 | 第17页 |
| 3.3 细胞凋亡与雄性生殖功能关系 | 第17页 |
| 4. 死亡受体通路 | 第17-21页 |
| 4.1 Fas和FasL | 第18页 |
| 4.2 FADD和DAXX | 第18-19页 |
| 4.3 caspase家族 | 第19-20页 |
| 4.4 Fas介导的凋亡通路 | 第20-21页 |
| 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 试验研究 | 第22-51页 |
| 第一章 ZEA对大鼠睾丸支持细胞Fas/FasL凋亡信号通路的影响 | 第22-33页 |
| 1 材料与方法 | 第22-28页 |
| 1.1 实验动物 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第22页 |
| 1.3 试剂配制 | 第22-23页 |
| 1.4 大鼠原代睾丸支持细胞的分离与培养 | 第23-24页 |
| 1.5 细胞染毒方法 | 第24页 |
| 1.6 细胞凋亡的检测 | 第24页 |
| 1.7 qRT-PCR | 第24-25页 |
| 1.7.1 RNA的去基因组及反转录 | 第24页 |
| 1.7.2 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 1.7.3 Real-Time PCR | 第25页 |
| 1.8 蛋白免疫印迹 | 第25-28页 |
| 1.8.1 蛋白样品的制备 | 第25页 |
| 1.8.2 SDS-PAGE电泳 | 第25-28页 |
| 1.9 统计分析 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-31页 |
| 2.1 不同浓度ZEA对睾丸支持细胞凋亡的影响 | 第28-29页 |
| 2.2 ZEA对睾丸支持细胞Fas/FasL通路转录水平的影响 | 第29页 |
| 2.3 不同浓度ZEA对睾丸支持细胞Fas/FasL通路中蛋白表达水平的影响 | 第29-30页 |
| 2.4 ZEA不同染毒时间对睾丸支持细胞Fas/FasL通路中蛋白表达水平的影响 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 Fas介导的信号通路在ZEA致睾丸支持细胞线粒体凋亡中的作用 | 第33-43页 |
| 1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 1.1 实验动物 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第33页 |
| 1.3 试剂配制 | 第33页 |
| 1.4 大鼠原代睾丸支持细胞的分离与培养 | 第33页 |
| 1.5 细胞染毒方法 | 第33-34页 |
| 1.6 线粒体与胞浆蛋白的制备 | 第34页 |
| 1.7 线粒体膜电位检测 | 第34页 |
| 1.8 qRT-PCR | 第34-35页 |
| 1.9 蛋白免疫印迹 | 第35页 |
| 1.10 细胞凋亡的检测 | 第35页 |
| 1.11 统计分析 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-41页 |
| 2.1 ZEA对睾丸支持细胞凋亡相关基因转录水平的影响 | 第35-36页 |
| 2.2 ZEA对睾丸支持细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响 | 第36页 |
| 2.3 ZEA对睾丸支持细胞BID的活化及CytC释放的影响 | 第36-37页 |
| 2.4 ZEA对睾丸支持细胞中caspase-9和caspase-3蛋白活化的影响 | 第37-38页 |
| 2.5 ZEA与Z-IETD-FMK联合对睾丸支持细胞凋亡率的影响 | 第38页 |
| 2.6 ZEA与Z-IETD-FMK联合使用检测ZEA对睾丸支持细胞Bax和Bcl-2的影响 | 第38-39页 |
| 2.7 ZEA与Z-IETD-FMK联合使用检测ZEA对睾丸支持细胞BID活化 | 第39页 |
| 2.8 ZEA与Z-IETD-FMK联合对睾丸支持细胞线粒体膜电位的影响 | 第39-40页 |
| 2.9 ZEA与Z-IETD-FMK联合对睾丸支持细胞CytC释放的影响 | 第40-41页 |
| 2.10 ZEA与Z-IETD-FMK联合对睾丸支持细胞caspase-9和caspase-3蛋白活化的影响 | 第41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 ZEA致睾丸支持细胞凋亡过程中Fas/FasL和JNK信号通路之间的调控关系 | 第43-51页 |
| 1. 材料与方法 | 第43-44页 |
| 1.1 实验动物 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第43页 |
| 1.3 试剂配制 | 第43页 |
| 1.4 大鼠原代睾丸支持细胞的分离与培养 | 第43页 |
| 1.5 染毒方法 | 第43-44页 |
| 1.7 细胞凋亡的检测 | 第44页 |
| 1.8 免疫荧光 | 第44页 |
| 1.9 稳定转染 | 第44页 |
| 2. 统计分析 | 第44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3.1 ZEA与Anti-FasL共处理对睾丸支持细胞凋亡的影响 | 第44-45页 |
| 3.2 ZEA与Anti-FasL共处理对睾丸支持细胞中FADD、caspase-8、caspase-9、caspase-3蛋白活化的影响 | 第45-46页 |
| 3.3 ZEA对睾丸支持细胞中DAXX的荧光表达的影响 | 第46页 |
| 3.4 ZEA对睾丸支持细胞中DAXX、ASK-1、JNK3、p-JNK蛋白表达的情况 | 第46-47页 |
| 3.5 ZEA与Z-IETD-FMK联合使用检测ZEA对睾丸支持细胞DAXX、ASK-1、JNK3、p-JNK蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.6 DAXX siRNA目的siRNA的筛选 | 第48页 |
| 3.7 ZEA与DAXX siRNA联合使用检测ZEA对睾丸支持细胞caspase-8、caspase-3蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-51页 |
| 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第65-66页 |
