| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 精子结合内化外源DNA的分子机制 | 第12页 |
| 1.2 精子与外源DNA结合及制备转基因动物的方法 | 第12-17页 |
| 1.2.1 精子与外源DNA的结合方式 | 第13-15页 |
| 1.2.2 外源DNA结合精子制备转基因动物的方法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 精原干细胞介导法 | 第16-17页 |
| 1.3 精子介导基因转移制备转基因动物的影响因素 | 第17-18页 |
| 1.3.1 精子供体 | 第17页 |
| 1.3.2 孵育时间及温度 | 第17页 |
| 1.3.3 外源DNA浓度 | 第17页 |
| 1.3.4 外源DNA的大小及结构 | 第17-18页 |
| 1.3.5 精清 | 第18页 |
| 1.4 精子介导基因转移技术存在的问题 | 第18页 |
| 1.5 精子介导基因转移技术应用前景 | 第18-20页 |
| 1.6 顶体反应体外诱导及检测 | 第20-21页 |
| 1.6.1 体外诱导顶体反应的方法 | 第20-21页 |
| 1.6.2 顶体反应的检测方法 | 第21页 |
| 1.6.2.1 电镜法 | 第21页 |
| 1.6.2.2 光学显微镜检测法 | 第21页 |
| 1.7 PiggyBac转座子研究进展 | 第21-22页 |
| 1.8 研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-33页 |
| 2.1 试验时间与地点 | 第23页 |
| 2.2 试验材料 | 第23-27页 |
| 2.2.1 试验动物 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 试验试剂配制 | 第23-26页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2.5 主要的生物分析软件 | 第26-27页 |
| 2.3 试验方法 | 第27-33页 |
| 2.3.1 质粒DNA | 第27页 |
| 2.3.2 质粒转化与筛选 | 第27页 |
| 2.3.3 质粒大提 | 第27-28页 |
| 2.3.4 质粒酶切鉴定 | 第28页 |
| 2.3.5 Cy-3标记DNA的准备 | 第28页 |
| 2.3.6 精子的准备及获能 | 第28页 |
| 2.3.7 精子与外源DNA共孵育 | 第28-29页 |
| 2.3.8 卵母细胞的收集及体外受精 | 第29页 |
| 2.3.9 合子期胚胎Cy-3-DNA荧光信号检测 | 第29页 |
| 2.3.10 顶体反应的诱导及检测 | 第29-30页 |
| 2.3.11 外源DNA共孵育精子诱导顶体反应 | 第30页 |
| 2.3.12 免疫荧光 | 第30页 |
| 2.3.13 囊胚期PCR检测 | 第30-31页 |
| 2.3.14 反转录PCR检测 | 第31页 |
| 2.3.15 质粒胞质内注射 | 第31-32页 |
| 2.3.16 统计分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-44页 |
| 3.1 不同质粒结构DNA与小鼠精子共孵育制备转基因胚胎 | 第33-34页 |
| 3.2 外源DNA不影响小鼠精子的活率 | 第34-35页 |
| 3.3 小鼠精子能有效的结合和内化外源DNA | 第35-38页 |
| 3.4 精子经顶体反应会丢失部分携带的外源DNA | 第38-40页 |
| 3.4.1 P_4浓度对小鼠精子顶体反应效率的影响 | 第38页 |
| 3.4.2 P_4诱导顶体反应时间对小鼠精子顶体反应效率的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.3 顶体反应对外源DNA携带效率的影响 | 第39-40页 |
| 3.5 精子能够介导外源DNA进入卵母细胞 | 第40-41页 |
| 3.6 SMGT-IVF制备转基因胚胎 | 第41-43页 |
| 3.7 胞质内质粒注射 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 不同质粒结构DNA与小鼠精子共孵育制备转基因胚胎 | 第44页 |
| 4.2 精子介导基因转移效率关键影响因素研究 | 第44-47页 |
| 4.2.1 外源DNA对精子活率的影响 | 第44-45页 |
| 4.2.2 小鼠精子对外源DNA的结合及内化 | 第45页 |
| 4.2.3 顶体反应对精子携带外源DNA效率的影响 | 第45页 |
| 4.2.4 精子介导基因转移 | 第45-46页 |
| 4.2.5 外源DNA的表达初探 | 第46页 |
| 4.2.6 外源DNA胞质内注射 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
