| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 糖苷酶 | 第11-16页 |
| 1.1.1 糖苷酶简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 糖苷酶在糖苷合成中的应用 | 第12-16页 |
| 1.1.2.1 功能性低聚糖的合成 | 第13页 |
| 1.1.2.2 烷基糖苷的合成 | 第13-14页 |
| 1.1.2.3 黄酮类化合物的糖基化 | 第14-16页 |
| 1.1.2.4 其他化合物的糖基化 | 第16页 |
| 1.2 嗜热糖苷酶 | 第16-18页 |
| 1.2.1 嗜热糖苷酶的研究现状 | 第16-18页 |
| 1.3 β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶 | 第18-20页 |
| 1.3.1 β-半乳糖苷酶 | 第18-19页 |
| 1.3.2 β-葡萄糖苷酶 | 第19-20页 |
| 1.4 研究背景和设计思想 | 第20-22页 |
| 第2章 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 和β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 的克隆与表达 | 第22-33页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 嗜热细菌 Thermotoga naphthophila RUK10 基因组的提取 | 第24页 |
| 2.3.2 引物的设计 | 第24页 |
| 2.3.3 目的基因的 PCR 及产物的纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.4 PCR 纯化产物的限制性酶切及纯化 | 第25页 |
| 2.3.5 载体 DNA 的限制性酶切及纯化 | 第25页 |
| 2.3.6 目的基因与载体的连接 | 第25-26页 |
| 2.3.7 重组质粒的转化及鉴定 | 第26页 |
| 2.3.8 目的基因的诱导表达 | 第26页 |
| 2.3.9 温度对目的蛋白表达水平的影响 | 第26页 |
| 2.3.10 IPTG 浓度对目的蛋白表达水平的影响 | 第26-27页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第27-32页 |
| 2.4.1 古细菌基因组的提取 | 第27页 |
| 2.4.2 目的基因的扩增 | 第27页 |
| 2.4.3 目的基因的纯化回收 | 第27-28页 |
| 2.4.4 重组质粒 pET-15b-1577 与 pET-28b-0602 的构建 | 第28页 |
| 2.4.5 重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4.6 重组质粒的测序 | 第29页 |
| 2.4.7 目的基因诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.4.8 诱导温度对目的基因表达的影响 | 第30-31页 |
| 2.4.9 IPTG 浓度对目的基因表达的影响 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第3章 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 的纯化与酶学性质表征 | 第33-43页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第33-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.3.1 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 的纯化 | 第34页 |
| 3.3.2 酶活的测定及蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| 3.3.3 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 最适反应温度的测定 | 第35页 |
| 3.3.4 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 最适反应 pH 的测定 | 第35-36页 |
| 3.3.5 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 稳定性测定 | 第36页 |
| 3.3.6 金属离子对酶活力的影响 | 第36页 |
| 3.3.7 有机溶剂对酶稳定性的影响 | 第36页 |
| 3.3.8 动力学常数的测定 | 第36-37页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第37-41页 |
| 3.4.1 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 的纯化 | 第37-38页 |
| 3.4.2 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 最适反应温度的测定 | 第38页 |
| 3.4.3 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 最适反应 pH 的测定 | 第38-39页 |
| 3.4.4 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 稳定性测定 | 第39-40页 |
| 3.4.5 金属离子对酶活力的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.6 有机溶剂对酶稳定性的影响 | 第41页 |
| 3.4.7 动力学常数的测定 | 第41页 |
| 3.5 小结 | 第41-43页 |
| 第4章 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 的纯化与酶学性质表征 | 第43-51页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第43-44页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第43-44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-46页 |
| 4.3.1 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 的纯化 | 第44页 |
| 4.3.2 酶活的测定及蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| 4.3.3 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 最适反应温度的测定 | 第45页 |
| 4.3.4 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 最适反应 pH 的测定 | 第45页 |
| 4.3.5 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 稳定性测定 | 第45-46页 |
| 4.3.6 动力学常数的测定 | 第46页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第46-50页 |
| 4.4.1 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 的纯化 | 第46-47页 |
| 4.4.2 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 最适反应温度的测定 | 第47页 |
| 4.4.3 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 最适反应 pH 的测定 | 第47-49页 |
| 4.4.4 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 稳定性测定 | 第49-50页 |
| 4.4.5 动力学常数的测定 | 第50页 |
| 4.5 小结 | 第50-51页 |
| 第5章 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 和β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 在合成烷基糖苷和低聚半乳糖中的应用 | 第51-57页 |
| 5.1 引言 | 第51页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第51-52页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第51页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第51-52页 |
| 5.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 5.3.1 β-半乳糖苷酶 Tnap1577 用于烷基糖苷的合成 | 第52页 |
| 5.3.2 β-葡萄糖苷酶 Tnap0602 用于低聚半乳糖的合成 | 第52页 |
| 5.3.3 TLC 检测 | 第52页 |
| 5.3.4 产物的纯化 | 第52-53页 |
| 5.3.5 产物分子量及结构的鉴定 | 第53页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第53-56页 |
| 5.4.1 烷基糖苷的合成 | 第53页 |
| 5.4.2 低聚半乳糖的合成 | 第53-55页 |
| 5.4.3 产物分子量及结构的鉴定 | 第55-56页 |
| 5.5 小结 | 第56-57页 |
| 全文总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 硕士期间发表文章 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
