| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 文献综述 | 第7-11页 |
| 1.1 大丽轮枝菌生物特性概述 | 第7页 |
| 1.2 大丽轮枝菌的致病机理 | 第7-8页 |
| 1.3 致萎毒素的前期研究 | 第8-9页 |
| 1.4 分泌系统蛋白 ATP 酶的研究 | 第9-10页 |
| 1.4.1 ATP 酶的类型 | 第9页 |
| 1.4.2 P 型 ATP 酶的功能 | 第9-10页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第10-11页 |
| 2 实验材料与方法 | 第11-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第11页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第11-12页 |
| 2.3 主要试剂及溶液的配制 | 第12-15页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第12页 |
| 2.3.2 主要培养基的配制 | 第12-15页 |
| 2.3.3 主要抗生素的配制和使用浓度 | 第15页 |
| 2.4 PCR 引物 | 第15-16页 |
| 2.5 实验方法 | 第16-24页 |
| 2.5.1 大丽轮枝菌中 VdATPase 基因的克隆 | 第16页 |
| 2.5.2 大丽轮枝菌总 DNA 的提取 | 第16-17页 |
| 2.5.3 pUC-Hyg、pGKO2-Gateway、pCTHyg 质粒 DNA 的提取 | 第17页 |
| 2.5.4 VdATPase 基因敲除载体的构建 | 第17-22页 |
| 2.5.5 农杆菌介导大丽轮枝菌的转化 | 第22-23页 |
| 2.5.6 质粒 pCTHyg 的转化 | 第23-24页 |
| 2.6 突变体菌株 VdATPase 的分离及验证 | 第24页 |
| 2.6.1 突变体菌株 VdATPase 的单孢分离 | 第24页 |
| 2.6.2 突变体菌株 VdATPase 的验证： | 第24页 |
| 2.7 VdATPase 基因缺失突变体 VdATPase 的生物学表型分析 | 第24-28页 |
| 2.7.1 突变体 VdATPase 菌株生长速率的测定 | 第24-25页 |
| 2.7.2 突变体 VdATPase 菌株对棉花叶片的侵染 | 第25-26页 |
| 2.7.3 突变体 VdATPase 菌株对植株侵染力的测定 | 第26-28页 |
| 3 实验结果与分析 | 第28-36页 |
| 3.1 大丽轮枝菌 P 型 ATPase 编码基因的电子克隆 | 第28-29页 |
| 3.2 大丽轮枝菌基因组 DNA 提取及检测 | 第29页 |
| 3.3 质粒 pCTHyg、pUC-Hyg、pGKO2-Gateway 的 DNA 提取及检测 | 第29页 |
| 3.4 构建大丽轮枝菌突变菌株 VdATPase | 第29-31页 |
| 3.4.1 基因敲除载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4.2 农杆菌介导大丽轮枝菌的转化及转化子 VdATPase 的分子验证 | 第30-31页 |
| 3.5 VdATPase 基因缺失突变体 VdATPase 的生物学表型分析 | 第31-36页 |
| 3.5.1 各类菌株生长速率的测定 | 第31-32页 |
| 3.5.2 不同菌株分泌蛋白的比较分析 | 第32-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42页 |
