| 中文摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 符号说明 | 第19-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-24页 |
| 1 蛋白质的O-GlcNAc糖基化 | 第20-23页 |
| 1.1 蛋白质O-GlcNAc糖基化过程中相关酶 | 第20-21页 |
| 1.2 O-GlcNAc糖基化修饰的供体UDP-GlcNAc | 第21-22页 |
| 1.3 蛋白质的O-GlcNAc糖基化与应激反应 | 第22-23页 |
| 2 本课题的研究意义 | 第23页 |
| 3 本课题拟解决的问题 | 第23-24页 |
| 第二章 顺铂诱导的蛋白质O-GlcNAc糖基化变化与OGA/OGT的相互关系以及OGA/OGT对顺铂抗肿瘤活性的影响 | 第24-53页 |
| 1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2 仪器设备 | 第27-28页 |
| 3 实验方法 | 第28-35页 |
| 3.1 Western blotting测定药物对细胞蛋白质表达的影响 | 第28-29页 |
| 3.2 实时定量PCR测定OGA、OGT的mRNA水平 | 第29-31页 |
| 3.3 H1299细胞中OGA活性的测定 | 第31-32页 |
| 3.4 H1299细胞中OGT活性的测定 | 第32页 |
| 3.5 牛晶状体蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第32-33页 |
| 3.6 细胞质蛋白和细胞核蛋白的提取 | 第33-34页 |
| 3.7 SRB法检测肿瘤细胞的增殖 | 第34页 |
| 3.8 Annexin V-FITC/PI法测定肿瘤细胞的凋亡 | 第34-35页 |
| 4 实验结果 | 第35-51页 |
| 4.1 不同药物对肿瘤细胞的蛋白质O-GlcNAc糖基化的影响 | 第35-36页 |
| 4.2 CDDP对蛋白质O-GlcNAc糖基化及相关蛋白表达的影响 | 第36-38页 |
| 4.3 H1299细胞中CDDP对OGA和OGT的mRNA水平的影响 | 第38-39页 |
| 4.4 H1299细胞中CDDP对OGA和OGT活性的影响 | 第39-41页 |
| 4.5 H1299细胞中CDDP对OGT和OGA的细胞内分布的影响 | 第41-42页 |
| 4.6 OGA抑制剂对CDDP诱导的O-GlcNAc糖基化的影响 | 第42-44页 |
| 4.7 OGA抑制剂对CDDP诱导的细胞增殖抑制的影响 | 第44-45页 |
| 4.8 OGA抑制剂对CDDP诱导的细胞凋亡的影响 | 第45-47页 |
| 4.9 OGT抑制剂对CDDP诱导的O-GlcNAc糖基化的影响 | 第47-48页 |
| 4.10 OGT抑制剂对CDDP诱导的细胞增殖抑制的影响 | 第48-49页 |
| 4.11 OGT抑制剂对CDDP诱导的细胞凋亡的影响 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 顺铂诱导的蛋白质O-GlcNAc糖基化变化与供体UDP-GlcNAc的相互关系以及UDP-GlcNAc的浓度对顺铂抗肿瘤活性的影响 | 第53-68页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| 2 仪器设备 | 第54页 |
| 3 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.1 HPLC检测肿瘤细胞中UDP-GlcNAc含量 | 第54-55页 |
| 3.2 肿瘤细胞中ATP含量的测定 | 第55-56页 |
| 3.3 肿瘤细胞中葡萄糖含量的测定 | 第56-57页 |
| 3.4 肿瘤细胞中丙酮酸含量的测定 | 第57页 |
| 4 实验结果 | 第57-66页 |
| 4.1 CDDP对肺癌细胞中UDP-GlcNAc含量的影响 | 第57-59页 |
| 4.2 GFAT1的抑制剂DON对H1299细胞中UDP-GlcNAc含量的影响 | 第59-61页 |
| 4.3 GFAT1的抑制剂DON对CDDP诱导的蛋白质O-GlcNAc糖基化变化的影响 | 第61页 |
| 4.4 葡萄糖对CDDP诱导的蛋白质O-GlcNAc糖基化变化的影响 | 第61-63页 |
| 4.5 谷氨酰胺对CDDP诱导的蛋白质O-GlcNAc糖基化变化的影响 | 第63-64页 |
| 4.6 CDDP对H1299细胞中ATP含量的影响 | 第64-65页 |
| 4.7 CDDP对H1299细胞中葡萄糖含量的影响 | 第65页 |
| 4.8 CDDP对H1299细胞中丙酮酸含量的影响 | 第65-66页 |
| 5 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 顺铂对O-GlcNAc糖基化蛋白质的表达谱差异分析 | 第68-74页 |
| 1 实验材料 | 第68-69页 |
| 2 仪器设备 | 第69页 |
| 3 实验方法 | 第69-71页 |
| 3.1 细胞中O-GlcNAc糖基化蛋白质的制备 | 第69-70页 |
| 3.2 银染法初步检测糖基化蛋白质的差异 | 第70页 |
| 3.3 O-GlcNAc糖基化蛋白质表达差异的质谱分析 | 第70-71页 |
| 4 实验结果 | 第71-73页 |
| 4.1 SDS-PAGE电泳考染结果 | 第71-72页 |
| 4.2 质谱鉴定 | 第72-73页 |
| 5 讨论 | 第73-74页 |
| 第五章 在动物体内顺铂活性与蛋白质O-GlcNAc糖基化的关系 | 第74-82页 |
| 1 实验材料 | 第74-75页 |
| 1.1 细胞株 | 第74页 |
| 1.2 实验动物 | 第74页 |
| 1.3 主要试剂 | 第74-75页 |
| 2 仪器设备 | 第75页 |
| 3 实验方法及步骤 | 第75-76页 |
| 3.1 移植瘤模型的构建 | 第75-76页 |
| 3.2 裸鼠肿瘤组织和正常组织中蛋白质糖基化水平的测定 | 第76页 |
| 4 实验结果 | 第76-81页 |
| 4.1 药物对裸鼠体重及肿瘤体积的影响 | 第76-78页 |
| 4.2 在裸鼠肿瘤组织中CDDP对蛋白质O-GlcNAc糖基化的影响 | 第78-79页 |
| 4.3 在裸鼠正常组织中CDDP对蛋白质O-GlcNAc糖基化的影响 | 第79-81页 |
| 5 讨论 | 第81-82页 |
| 全文总结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第88-89页 |
| 附件 | 第89页 |
