| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 酶组装 | 第10-12页 |
| 1.1.1 酶组装的简述 | 第10页 |
| 1.1.2 酶组装的方式 | 第10-12页 |
| 1.2 光控元件 | 第12-18页 |
| 1.2.1 光遗传学概述 | 第12-15页 |
| 1.2.2 光控元件的分类 | 第15-17页 |
| 1.2.3 光控元件的发展和应用 | 第17-18页 |
| 1.3 光诱导二聚化系统 | 第18-20页 |
| 1.4 腈水解酶 | 第20-21页 |
| 1.5 本论文主要研究目的及内容 | 第21-23页 |
| 第2章 光控元件和光诱导二聚化系统的选择 | 第23-37页 |
| 2.1 引言 | 第23-25页 |
| 2.1.1 光控元件LOV2 | 第23-24页 |
| 2.1.2 光控元件VVD | 第24页 |
| 2.1.3 光控元件Dronpa | 第24-25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.2.1 实验菌种与质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 PCR引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.2.5 缓冲液与培养基 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第29-31页 |
| 2.3.2 定点突变 | 第31页 |
| 2.3.3 蛋白表达和鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第32-36页 |
| 2.4.1 光控元件VVD的可溶性表达 | 第32-34页 |
| 2.4.2 光控元件Dronpa的可溶性表达 | 第34-35页 |
| 2.4.3 光控元件AsLOV2的可溶性表达 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 光控元件与腈水解酶的融合 | 第37-44页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 实验菌株与质粒构建 | 第37页 |
| 3.2.2 PCR引物序列 | 第37页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.4 主要仪器与设备 | 第38页 |
| 3.2.5 缓冲液与培养基 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 质粒构建 | 第38-39页 |
| 3.3.2 蛋白表达与纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.3 酶活测定 | 第40-42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-43页 |
| 3.4.1 BCNIT与光控元件AsLOV2-SsrA融合 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 融合蛋白的胞外光控可逆组装 | 第44-51页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.1 实验菌株与质粒 | 第44页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-46页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第45页 |
| 4.3.2 蛋白表达与纯化 | 第45页 |
| 4.3.3 胞外光控酶组装与可逆性分析 | 第45页 |
| 4.3.4 动态光散射分析 | 第45页 |
| 4.3.5 扫描电子显微镜分析 | 第45页 |
| 4.3.6 OD_(600)值表征组装与解离 | 第45-46页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第46-50页 |
| 4.4.1 光控腈水解酶组装的思路 | 第46页 |
| 4.4.2 动态光散射解析组装和解离过程 | 第46-48页 |
| 4.4.3 胞外超分子组装体的形态分析 | 第48页 |
| 4.4.4 不同光照强度的影响 | 第48-49页 |
| 4.4.5 胞外组装和解离的可逆分析 | 第49-50页 |
| 4.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第5章 融合蛋白的胞内光控可逆组装 | 第51-56页 |
| 5.1 引言 | 第51页 |
| 5.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 5.2.1 质粒与菌种 | 第51页 |
| 5.2.2 扩增引物 | 第51-52页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第52页 |
| 5.2.4 主要仪器设备 | 第52页 |
| 5.2.5 缓冲液与培养基 | 第52页 |
| 5.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 5.3.1 质粒构建 | 第52-53页 |
| 5.3.2 共转化与蛋白表达 | 第53页 |
| 5.3.3 荧光分析 | 第53页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第53-55页 |
| 5.4.1 双分子荧光互补 | 第53-55页 |
| 5.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第6章 光控酶组装效果的评价 | 第56-60页 |
| 6.1 引言 | 第56页 |
| 6.2 实验材料 | 第56页 |
| 6.3 实验方法 | 第56-57页 |
| 6.3.1 胞外组装体酶活实验 | 第56页 |
| 6.3.2 胞内组装体酶活实验 | 第56-57页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第57-59页 |
| 6.4.1 胞外光控组装体酶活分析 | 第57-58页 |
| 6.4.2 胞外组装体的循环利用率 | 第58页 |
| 6.4.3 胞内光控组装体酶活分析 | 第58-59页 |
| 6.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第7章 总结与展望 | 第60-62页 |
| 7.1 课题总结 | 第60-61页 |
| 7.2 课题展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 在校期间的科研成果 | 第72页 |