| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-45页 |
| 1 抗菌肽简介 | 第17-19页 |
| 2. 昆虫抗菌肽的研究进展 | 第19-37页 |
| 2.1 抗菌肽的理化性质 | 第19页 |
| 2.2 抗菌肽的分类 | 第19-21页 |
| 2.2.1 天蚕素类 | 第20页 |
| 2.2.2 富含半胱氨酸的抗菌肽 | 第20页 |
| 2.2.3 富含脯氨酸或精氨酸的抗菌肽 | 第20-21页 |
| 2.2.4 富含甘氨酸的抗菌肽 | 第21页 |
| 2.3 抗菌肽的生物活性 | 第21-24页 |
| 2.3.1 抗细菌活性 | 第22页 |
| 2.3.2 抗真菌活性 | 第22页 |
| 2.3.3 抗肿瘤活性 | 第22页 |
| 2.3.4 抗病毒活性 | 第22-23页 |
| 2.3.5 抗原虫活性 | 第23页 |
| 2.3.6 抗菌肽在炎症反应中的调节作用 | 第23-24页 |
| 2.3.7 抗菌肽的其它活性 | 第24页 |
| 2.4 抗菌肽的作用机理 | 第24-28页 |
| 2.4.1 抗菌机制 | 第24-26页 |
| 2.4.1.1 膜裂解型机制 | 第24-26页 |
| 2.4.1.2 非膜裂解型 | 第26页 |
| 2.4.2 抗真菌机制 | 第26页 |
| 2.4.3 抗癌机制 | 第26-27页 |
| 2.4.4 抗病毒机制 | 第27页 |
| 2.4.5 抗原虫机制 | 第27页 |
| 2.4.6 抗菌肽的选择性的生物活性 | 第27-28页 |
| 2.5 抗菌肽结构与功能的关系 | 第28-31页 |
| 2.5.1 β-折叠型 | 第29页 |
| 2.5.2 α-螺旋型 | 第29-30页 |
| 2.5.3 伸展型 | 第30-31页 |
| 2.5.4 环型结构 | 第31页 |
| 2.6 抗菌肽的制备和分离纯化 | 第31-33页 |
| 2.6.1 直接提取抗菌肽 | 第31-32页 |
| 2.6.2 蛋白质合成法制备抗菌肽 | 第32页 |
| 2.6.3 基因工程制备抗菌肽 | 第32-33页 |
| 2.7 抗菌肽的应用 | 第33-37页 |
| 2.7.1 在农业、畜牧业中的应用 | 第33页 |
| 2.7.2 抗菌肽药物的研发 | 第33-37页 |
| 3. 流感及流感病毒 | 第37-45页 |
| 3.1 流感及流感病毒概述 | 第37页 |
| 3.2 流感病毒的结构 | 第37-40页 |
| 3.2.1 流感病毒的核心 | 第38页 |
| 3.2.2 基质 | 第38-39页 |
| 3.2.3 包膜 | 第39-40页 |
| 3.3 流感病毒的复制 | 第40-41页 |
| 3.4 流感病毒的变异 | 第41-42页 |
| 3.5 流感的预防和治疗 | 第42-45页 |
| 3.5.1 流感疫苗 | 第42页 |
| 3.5.2 抗流感病毒药物 | 第42-45页 |
| 3.5.2.1 神经氨酸酶抑制剂 | 第42-43页 |
| 3.5.2.2 M2通道抑制剂 | 第43页 |
| 3.5.2.3 血凝素抑制剂 | 第43页 |
| 3.5.2.4 RNAi技术抗流感病毒 | 第43-45页 |
| 第二章 小菜蛾抗菌肽pxCECA1基因的克隆及序列分析 | 第45-55页 |
| 1 实验材料及方法 | 第45-50页 |
| 1.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 1.1.1 供试昆虫 | 第45页 |
| 1.1.2 菌株 | 第45页 |
| 1.1.3 质粒载体 | 第45页 |
| 1.1.4 培养基 | 第45页 |
| 1.1.5 溶液和试剂 | 第45-46页 |
| 1.1.6 PCR扩增酶及其它酶类 | 第46页 |
| 1.1.7 扩增引物 | 第46页 |
| 1.2 实验方法 | 第46-50页 |
| 1.2.1 大肠杆菌对小菜蛾幼虫的诱导 | 第46页 |
| 1.2.2 无RNA酶实验器材的准备 | 第46页 |
| 1.2.3 小菜蛾总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 1.2.4 总RNA的电泳 | 第47页 |
| 1.2.5 小菜蛾抗菌肽基因pxCECA1的克隆 | 第47-50页 |
| 1.2.5.1 cDNA第一链的合成 | 第47页 |
| 1.2.5.2 小菜蛾抗菌肽基因pxCECA1和内参muscle actin基因的PCR扩增 | 第47-48页 |
| 1.2.5.3 PCR产物的回收 | 第48页 |
| 1.2.5.4 PCR产物3'末端加A | 第48页 |
| 1.2.2.5 T-A连接 | 第48-49页 |
| 1.2.2.6 感受态细胞的制备 | 第49页 |
| 1.2.2.7 转化 | 第49页 |
| 1.2.2.8 转化子的鉴定 | 第49页 |
| 1.2.2.9 pxCECA1基因序列的分析 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-54页 |
| 2.1 小菜蛾抗菌肽pxCECA1基因的克隆 | 第50-54页 |
| 2.1.1 小菜蛾总RNA的提取 | 第50页 |
| 2.1.2 pxCECA1和muscle actin的反转录PCR | 第50-51页 |
| 2.1.3 pxCECA1的测序结果和序列分析 | 第51-53页 |
| 2.1.4 cecropin家族抗菌肽的同源性分析 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 小菜蛾抗菌肽pxCECA1的表达纯化 | 第55-75页 |
| 1 材料与方法 | 第55-64页 |
| 1.1 实验材料 | 第55-57页 |
| 1.1.1 菌株 | 第55页 |
| 1.1.2 质粒载体 | 第55页 |
| 1.1.3 培养基 | 第55页 |
| 1.1.4 溶液和试剂 | 第55-57页 |
| 1.1.5 PCR扩增酶及其它酶类 | 第57页 |
| 1.1.6 填料及其他器材 | 第57页 |
| 1.1.7 扩增引物 | 第57页 |
| 1.2 实验方法 | 第57-64页 |
| 1.2.1 pxCECA1在pET系统中的表达纯化 | 第57-60页 |
| 1.2.1.1 引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第57-58页 |
| 1.2.1.2 PCR产物的回收 | 第58页 |
| 1.2.1.3 目的片段和载体双酶切 | 第58页 |
| 1.2.1.4 酶切片段的连接 | 第58-59页 |
| 1.2.1.5 连接产物转化E.coli DH5a | 第59页 |
| 1.2.1.6 转化子的鉴定 | 第59页 |
| 1.2.1.7 表达载体转化E.coli BL21(DE3) | 第59页 |
| 1.2.1.8 pxCECA1融合蛋白的诱导表达 | 第59页 |
| 1.2.1.9 表达产物的可溶性分析 | 第59-60页 |
| 1.2.1.10 SDS-PAGE分析 | 第60页 |
| 1.2.1.11 融合蛋白的分离纯化 | 第60页 |
| 1.2.1.12 融合蛋白的酶切以及pxCECA1的纯化 | 第60页 |
| 1.2.2 pxCECA1在IMPACT-TWIN系统中的表达纯化 | 第60-64页 |
| 1.2.2.1 表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 1.2.2.2 融合蛋白CBD-intein-pxCECA1的诱导表达 | 第61页 |
| 1.2.2.3 表达产物的可溶性分析 | 第61页 |
| 1.2.2.4 SDS-PAGE分析 | 第61页 |
| 1.2.2.5 融合蛋白的分离纯化 | 第61页 |
| 1.2.2.6 pH值对自切效率的影响 | 第61-62页 |
| 1.2.2.7 温度对蛋白产量的影响 | 第62页 |
| 1.2.2.8 Tricine-SDS-PAGE鉴定目的蛋白 | 第62-63页 |
| 1.2.2.9 蛋白质定量 | 第63页 |
| 1.2.2.10 质谱分析 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-72页 |
| 2.1 表达载体的构建 | 第64-66页 |
| 2.2 pxCECA1在pET系统中的表达 | 第66页 |
| 2.3 融合蛋白的纯化以及pxCECA1的酶切释放 | 第66-67页 |
| 2.4 pxCECAl在IMPACT-TWIN系统中的表达 | 第67-68页 |
| 2.5 pH对融合蛋白切割效率的影响 | 第68-69页 |
| 2.6 温度对目的蛋白pxCECA1产量的影响 | 第69-70页 |
| 2.7 蛋白定量 | 第70-71页 |
| 2.8 目的蛋白相对分子量的鉴定 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-75页 |
| 第四章 pxCECAl的抗菌活性 | 第75-83页 |
| 1 材料与方法 | 第75-78页 |
| 1.1 材料 | 第75页 |
| 1.1.1 菌株 | 第75页 |
| 1.1.2 培养基及其它溶液试剂 | 第75页 |
| 1.1.3 其它器材 | 第75页 |
| 1.2 实验方法 | 第75-78页 |
| 1.2.1 最小抑菌浓度(MIC)实验 | 第75-76页 |
| 1.2.2 生长抑制实验 | 第76页 |
| 1.2.3 杀菌实验 | 第76页 |
| 1.2.4 过氧化氢酶释放实验 | 第76-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-82页 |
| 2.1 最小抑菌浓度(MIC) | 第78页 |
| 2.2 生长抑制实验 | 第78-80页 |
| 2.3 杀菌实验 | 第80页 |
| 2.4 过氧化氢酶释放实验 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| 第五章 pxCECA1抗流感病毒H_3N_2研究 | 第83-96页 |
| 1. 材料与方法 | 第83-88页 |
| 1.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 1.1.1 实验细胞和病毒 | 第83页 |
| 1.1.2 培养基及其它溶液试剂 | 第83页 |
| 1.1.3 其它器材 | 第83-84页 |
| 1.2 实验方法 | 第84-88页 |
| 1.2.1 流感病毒的复苏 | 第84页 |
| 1.2.2 流感病毒的鉴定和效价测定 | 第84-85页 |
| 1.2.3 pxCECA1的细胞毒性 | 第85页 |
| 1.2.3.1 溶血性 | 第85页 |
| 1.2.3.2 对MDCK和Vero细胞的细胞毒性 | 第85页 |
| 1.2.4 pxCECA1对流感病毒在MDCK细胞上的抑制作用 | 第85-86页 |
| 1.2.4.1 pxCECA1直接对流感病毒的抑制作用 | 第85-86页 |
| 1.2.4.2 pxCECA1对流感病毒进入细胞后的抑制作用 | 第86页 |
| 1.2.5 pxCECA1抑制流感的作用机制 | 第86-88页 |
| 1.2.5.1 血凝素抑制实验(HI) | 第86-87页 |
| 1.2.5.2 神经氨酸酶抑制实验 | 第87-88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-94页 |
| 2.1 H3N2的鉴定和效价测定 | 第88-89页 |
| 2.2 pxCECA1的细胞毒性 | 第89页 |
| 2.3 pxCECA1对流感病毒的直接作用 | 第89-91页 |
| 2.4 pxCECA1对流感病毒进入细胞后的抑制作用 | 第91-93页 |
| 2.5 血凝素抑制实验 | 第93页 |
| 2.6 神经氨酸酶抑制实验 | 第93-94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 部分缩略词一览表 | 第106-107页 |
| 攻博期间的科研成果 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
