| 前言 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写词表 | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 真核细胞细胞核结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.2 核纤层蛋白与疾病 | 第15-19页 |
| 1.2.1 核纤层的组成 | 第15页 |
| 1.2.2 核纤层蛋白 | 第15-18页 |
| 1.2.3 Lamin蛋白缺陷导致的遗传疾病 | 第18-19页 |
| 1.3 BCCIP研究进展 | 第19-25页 |
| 1.3.1 BCCIP基因及蛋白 | 第19-20页 |
| 1.3.2 BCCIP的细胞生物学功能 | 第20-23页 |
| 1.3.3 BCCIP与肿瘤的相关性 | 第23-24页 |
| 1.3.4 BCCIP对小鼠胚胎发育的影响 | 第24页 |
| 1.3.5 BCCIP对小鼠神经发育的影响 | 第24-25页 |
| 1.4 BCCIP维持Lamin B1依赖的细胞核功能 | 第25-26页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第26-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-31页 |
| 2.1.1 细胞系及培养条件 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂及来源 | 第26-28页 |
| 2.1.3 质粒、菌株及融合蛋白 | 第28页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.5 常用试剂的配制 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-47页 |
| 2.2.1 细胞培养和冻存 | 第31页 |
| 2.2.2 BCCIP条件性敲低质粒构建 | 第31-33页 |
| 2.2.3 感受态细菌的制备及细菌的转化 | 第33-36页 |
| 2.2.4 BCCIP条件性敲低细胞系构建 | 第36页 |
| 2.2.5 BCCIP蛋白shRNA抗性突变体制备 | 第36-38页 |
| 2.2.6 腺病毒的制备 | 第38页 |
| 2.2.7 腺病毒感染 | 第38-39页 |
| 2.2.8 逆转录病毒的制备 | 第39页 |
| 2.2.9 逆转录病毒感染 | 第39-40页 |
| 2.2.10 细胞集落形成实验 | 第40页 |
| 2.2.11 生长曲线的绘制 | 第40页 |
| 2.2.12 免疫印迹检测 | 第40-42页 |
| 2.2.13 细胞免疫荧光染色 | 第42页 |
| 2.2.14 LMNB1基因克隆及载体构建 | 第42-43页 |
| 2.2.15 免疫共沉淀反应 | 第43-44页 |
| 2.2.16 His标记重组蛋白诱导表达及纯化 | 第44页 |
| 2.2.17 体外重组蛋白免疫共沉淀反应 | 第44页 |
| 2.2.18 免疫共沉淀反应鉴定BCCIP与LB1相互作用结合区域 | 第44-45页 |
| 2.2.19 总RNA提取 | 第45-46页 |
| 2.2.20 逆转录合成cDNA及半定量RT-PCR检测Lamin B1 mRNA水平 | 第46-47页 |
| 2.2.21 蛋白稳定性研究 | 第47页 |
| 2.3 数据的获取及分析 | 第47-48页 |
| 2.3.1 数据的获取 | 第47页 |
| 2.3.2 凝胶成像及分析 | 第47页 |
| 2.3.3 细胞核形态分析 | 第47页 |
| 2.3.4 荧光信号强度分析 | 第47页 |
| 2.3.5 统计分析 | 第47-48页 |
| 第3章 实验结果 | 第48-74页 |
| 3.1 BCCIP基因条件性敲低细胞系实验系统构建 | 第48-51页 |
| 3.1.1 pBS/U6-ploxPneo条件性基因敲低系统 | 第48页 |
| 3.1.2 BCCIP条件性敲低细胞系HT-CKD | 第48-49页 |
| 3.1.3 BCCIP条件性敲低细胞系的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.1.4 Cre介导的HT-CKD细胞中外源BCCIP条件性敲低 | 第50-51页 |
| 3.2 BCCIP条件性敲除MEF细胞 | 第51-52页 |
| 3.3 BCCIP的表达对细胞生长的影响 | 第52-56页 |
| 3.3.1 HT-CKD细胞生长曲线 | 第52-53页 |
| 3.3.2 MEF-CKO细胞生长曲线 | 第53-54页 |
| 3.3.3 BCCIP蛋白表达补偿实验 | 第54-56页 |
| 3.4 BCCIP表达对染色质及细胞核形态的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.1 BCCIP基因对染色质结构的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.2 BCCIP表达对细胞核形态的影响 | 第57页 |
| 3.5 BCCIP蛋白与Lamin B1蛋白在细胞核膜的共定位 | 第57-58页 |
| 3.6 BCCIP与Lamin B1的相互作用 | 第58-63页 |
| 3.6.1 Lamin B1与BCCIP免疫共沉淀 | 第58-59页 |
| 3.6.2 外源性BCCIP与Lamin B1免疫共沉淀 | 第59-60页 |
| 3.6.3 融合重组蛋白GST沉降分析 | 第60-61页 |
| 3.6.4 外源性BCCIP片段与Lamin B1的免疫共沉淀 | 第61-62页 |
| 3.6.5 外源性Lamin B1片段与BCCIP的免疫共沉淀 | 第62-63页 |
| 3.7 BCCIP对Lamin B1蛋白核膜定位及表达水平的影响 | 第63-68页 |
| 3.7.1 BCCIP表达缺陷降低Lamin B1在HT-CKD细胞核膜定位及蛋白表达 | 第63-65页 |
| 3.7.2 BCCIP表达缺失降低Lamin B1在MEF-CKO细胞核膜定位及蛋白表达 | 第65-68页 |
| 3.8 BCCIP的表达对Lamin B1依赖的细胞核功能的影响 | 第68-71页 |
| 3.8.1 BCCIP表达缺失导致核仁分布异常 | 第68-70页 |
| 3.8.2 BCCIP表达缺失导致RNA聚合酶Ⅱ转录活性降低 | 第70-71页 |
| 3.9 BCCIP蛋白对Lamin B1蛋白表达水平的调控 | 第71-74页 |
| 3.9.1 Lamin B1 mRNA检测 | 第71-72页 |
| 3.9.2 Lamin B1蛋白稳定性的研究 | 第72-74页 |
| 第4章 讨论 | 第74-86页 |
| 4.1 RNA干涉 | 第75-76页 |
| 4.2 pBS/U6-loxPneo条件性基因敲低系统 | 第76-77页 |
| 4.3 BCCIP基因条件性敲低细胞系及BCCIP互补修复系统 | 第77-78页 |
| 4.4 BCCIP基因条件性敲除小鼠胚胎成纤维细胞 | 第78-80页 |
| 4.5 发现和鉴定BCCIP相互作用蛋白—Lamin B1 | 第80-81页 |
| 4.6 BCCIP的表达对染色质结构和细胞核形态的影响 | 第81页 |
| 4.7 BCCIP表达对核仁分布和细胞转录功能的影响 | 第81-82页 |
| 4.8 共聚焦显微镜技术在Lamin B1核膜定位研究中的应用 | 第82-83页 |
| 4.9 BCCIP对Lamin B1蛋白表达水平的调控 | 第83-84页 |
| 4.10 BCCIP基因缺陷与肿瘤的相关性 | 第84-86页 |
| 第5章 结论 | 第86-88页 |
| 第6章 实验创新点 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-102页 |
| 作者简介及在学期间科研成果 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
