| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 前言 | 第14页 |
| 1.2 果糖基转移酶概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 果糖基转移酶催化反应机理 | 第14-15页 |
| 1.2.2 果糖基转移酶的来源 | 第15页 |
| 1.2.3 果糖基转移酶的酶学性质 | 第15-16页 |
| 1.2.4 果糖基转移酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 米曲霉概述 | 第17-19页 |
| 1.3.1 米曲霉的菌落形态特征及分布 | 第17页 |
| 1.3.2 米曲霉在工业上的应用 | 第17-19页 |
| 1.4 工业微生物育种途径 | 第19-22页 |
| 1.4.1 传统诱变育种途径 | 第19-20页 |
| 1.4.2 杂交育种途径 | 第20页 |
| 1.4.3 基因工程育种途径 | 第20-21页 |
| 1.4.4 代谢工程育种 | 第21页 |
| 1.4.5 定向进化育种途径 | 第21-22页 |
| 1.5 发酵培养基的优化 | 第22-23页 |
| 1.5.1 布列可特-博曼设计法 | 第22-23页 |
| 1.5.2 响应面方法 | 第23页 |
| 1.6 本课题研究的意义及内容 | 第23-25页 |
| 1.6.1 本课题的研究意义及可行性 | 第23-24页 |
| 1.6.2 本课题的主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 产果糖基转移酶米曲霉菌株的紫外-氯化锂复合诱变 | 第25-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 实验菌种 | 第25页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.3 培养基与主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 菌株的活化 | 第26-27页 |
| 2.2.2 单细胞悬浮液的制备 | 第27页 |
| 2.2.3 出发菌株生长曲线和产酶曲线绘制 | 第27页 |
| 2.2.4 紫外-LiCl 复合诱变方法 | 第27页 |
| 2.2.5 诱变菌株的筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.6 菌丝果糖基转移酶活检测方法 | 第28-29页 |
| 2.3 试验结果与讨论 | 第29-35页 |
| 2.3.1 出发菌株生长曲线和产酶曲线 | 第29页 |
| 2.3.2 紫外线辐照诱变时间的确定 | 第29-30页 |
| 2.3.3 反相高效液相色谱测定结果 | 第30-32页 |
| 2.3.4 紫外-LiCl 复合诱变筛选结果 | 第32-35页 |
| 2.4 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 产果糖基转移酶米曲霉菌株的原生质体融合育种 | 第36-44页 |
| 3.1 试验材料 | 第36页 |
| 3.1.1 出发菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第36页 |
| 3.1.3 培养基与主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.4 培养基与溶液的配制 | 第36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 出发菌株传代活化 | 第36-37页 |
| 3.2.2 原生质体的制备 | 第37页 |
| 3.2.3 原生质体的非对称灭活 | 第37页 |
| 3.2.4 原生质体的融合 | 第37页 |
| 3.2.5 融合菌株的选择 | 第37页 |
| 3.2.6 高效液相色谱测定果糖基转移酶酶活 | 第37-38页 |
| 3.2.7 遗传稳定性试验 | 第38页 |
| 3.2.8 突变株形态学观察 | 第38页 |
| 3.3 试验结果与讨论 | 第38-43页 |
| 3.3.1 原生质体的非对称灭活 | 第38-39页 |
| 3.3.2 融合菌株筛选结果 | 第39-42页 |
| 3.3.3 融合菌株的遗传稳定性测定结果 | 第42页 |
| 3.3.4 突变株形态学观察 | 第42-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 筛选菌株摇瓶发酵的工艺优化实验 | 第44-64页 |
| 4.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 实验菌种 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂和药品 | 第44-45页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第45页 |
| 4.1.4 培养基配制 | 第45页 |
| 4.2 试验方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 菌株发酵培养摇瓶单因素优化 | 第45-47页 |
| 4.2.2 菌丝果糖基转移酶活检测方法 | 第47页 |
| 4.2.3 Plackett-Βurman 实验发酵优化 | 第47-48页 |
| 4.2.4 爬坡实验发酵优化 | 第48页 |
| 4.2.5 响应面实验发酵优化 | 第48-49页 |
| 4.2.6 验证响应面实验预测结果实验 | 第49页 |
| 4.3 试验结果与讨论 | 第49-62页 |
| 4.3.1 单因素发酵优化结果与分析 | 第49-54页 |
| 4.3.2 发酵条件的优化 | 第54-57页 |
| 4.3.3 Plackett-Burman 实验优化结果与分析 | 第57-58页 |
| 4.3.4 爬坡实验发酵优化结果与分析 | 第58-59页 |
| 4.3.5 响应面实验发酵优化结果与分析 | 第59-62页 |
| 4.3.6 验证响应面实验预测值实验结果与分析 | 第62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 第五章 高产果糖基转移酶菌株的中试放大实验 | 第64-73页 |
| 5.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 5.1.1 实验菌种 | 第64页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第64页 |
| 5.1.3 主要试剂和溶液 | 第64-65页 |
| 5.1.4 培养基与溶液的配制 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-66页 |
| 5.2.1 种子液的制备 | 第65页 |
| 5.2.2 种子液菌丝体酶活的测定 | 第65页 |
| 5.2.3 2L 发酵罐的发酵条件优化实验 | 第65-66页 |
| 5.2.4 发酵培养基 10L 发酵罐的放大实验 | 第66页 |
| 5.2.5 发酵培养基 500L 发酵罐的放大实验 | 第66页 |
| 5.3 实验结果和讨论 | 第66-71页 |
| 5.3.1 接种量的优化 | 第66-68页 |
| 5.3.2 转速的优化 | 第68-69页 |
| 5.3.3 通气量的优化 | 第69页 |
| 5.3.5 2L 罐中补糖流加工艺对菌体酶活力的影响 | 第69-70页 |
| 5.3.6 10L 发酵罐的中试放大实验 | 第70页 |
| 5.3.7 500L 发酵罐的中试放大实验 | 第70-71页 |
| 5.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-75页 |
| 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82页 |
