| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第9-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 植物光感受系统与信号转换系统 | 第13-16页 |
| 1.1.1 蓝光受体隐花色素的研宄现状 | 第14-15页 |
| 1.1.2 其他光受体的类型及功能 | 第15-16页 |
| 1.2 拟南芥CRY1蛋白的研宄现状 | 第16-18页 |
| 1.2.1 拟南芥CRY1蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 拟南芥CRY 1蛋白的功能 | 第17页 |
| 1.2.3 拟南芥CRY 1与其他蛋白的相互作用的研宄 | 第17-18页 |
| 1.3 拟南芥转录因子的研宄现状 | 第18-22页 |
| 1.3.1 拟南芥转录因子的分子结构与类型 | 第18-19页 |
| 1.3.2 拟南芥转录因子的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.3 拟南芥转录因子HB22的研宄进展 | 第20-22页 |
| 1.4 酵母双杂交技术 | 第22-23页 |
| 1.5 本论文工作设想 | 第23-25页 |
| 第2章 拟南芥中与CRY1相互作用的转录因子筛选 | 第25-46页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 实验试剂及相关溶液配制方法 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 复苏AH109菌株并检测其表型 | 第27-28页 |
| 2.2.2 空载质粒、bait质粒转化酵母 | 第28-29页 |
| 2.2.3 CRY1的毒性及自激活检测及3-AT浓度的确定 | 第29页 |
| 2.2.4 阳性克隆的初步确定及其蓝光响应检测 | 第29-31页 |
| 2.2.5 “真阳性”克隆的鉴定 | 第31-37页 |
| 2.2.6 “真阳性”克隆的P-半乳糖苷酶活性分析 | 第37-40页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第40-44页 |
| 2.3.1 AH109菌株表型检测 | 第40-41页 |
| 2.3.2 CRY1的毒性及自激活检测 | 第41页 |
| 2.3.3 CRY1相互作用蛋白的筛选和阳性克隆的蓝光响应检测 | 第41-42页 |
| 2.3.4 CRY1相互作用蛋白的鉴定及其蓝光响应分析 | 第42-43页 |
| 2.3.5 HB22与CRY1的相互作用分析 | 第43-44页 |
| 2.3.6 HB22与CRY1的相互作用的蓝光响应分析 | 第44页 |
| 2.4 本章小结 | 第44-46页 |
| 第3章 拟南芥转录因子HB22功能初步分析 | 第46-59页 |
| 3.1 实验材料、试剂、仪器 | 第46-47页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第46页 |
| 3.1.2 实验试剂及溶液配制方法 | 第46-47页 |
| 3.1.3 实验主要仪器 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-55页 |
| 3.2.1 拟南芥种子春化及消毒 | 第47页 |
| 3.2.2 拟南芥的播种及培养 | 第47-48页 |
| 3.2.3 拟南芥野生型总RNA提取 | 第48页 |
| 3.2.4 RNA 中 DNA 的去除 | 第48-49页 |
| 3.2.5 cDNA第一链的合成 | 第49页 |
| 3.2.6 引物的设计及合成 | 第49-50页 |
| 3.2.7 HB22基因CDS序列的扩增 | 第50页 |
| 3.2.8 PCR产物回收 | 第50页 |
| 3.2.9 酶切连接反应构建过表达载体 | 第50-51页 |
| 3.2.10 转化连接产物入DH5a | 第51页 |
| 3.2.11 菌液检测及测序 | 第51页 |
| 3.2.12 提取过表达载体质粒 | 第51页 |
| 3.2.13 农杆菌感受态细胞制备 | 第51-52页 |
| 3.2.14 电击法转化农杆菌 | 第52页 |
| 3.2.15 农杆菌菌液检测 | 第52页 |
| 3.2.16 花序浸泡法转化拟南芥 | 第52-53页 |
| 3.2.17 拟南芥过表达突变体的筛选与初步鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.18 HB22基因表达的组织特异性分析 | 第54页 |
| 3.2.19 实时荧光定量PCR法检测蓝光对HB22基因表达的调节 | 第54-55页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第55-57页 |
| 3.3.1 过表达载体 35S::HB22-PEGAD-MYC 的构建 | 第55页 |
| 3.3.2 HB22过表达株系的获得 | 第55-56页 |
| 3.3.3 HB22基因的组织特异性分析 | 第56-57页 |
| 3.3.4 蓝光对HB22基因表达的调节 | 第57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第4章 拟南芥转录因子HB22原核表达分析 | 第59-66页 |
| 4.1 实验材料、试剂、仪器 | 第59-60页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 4.1.2 实验试剂及溶液配制方法 | 第59-60页 |
| 4.1.3 实验主要仪器 | 第60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-63页 |
| 4.2.1 HB22基因的克隆与原核表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 4.2.2 pCold TF/HB22 的原核表达 | 第61页 |
| 4.2.3 pCold TF/HB22 原核表达产物的 SDS-PAGE 检测 | 第61-63页 |
| 4.2.4 pCold TF/HB22原核表达条件的优化 | 第63页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第63-65页 |
| 4.3.1 HB22基因的克隆与原核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.3.2 pCold TF/HB22原核表达产物的的SDS-PAGE检测 | 第64页 |
| 4.3.3 pCold TF/HB22原核表达条件的优化 | 第64-65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录A攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
