| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1 灰葡萄孢的研究进展 | 第11-20页 |
| 1.1 灰霉病的危害和分布 | 第11页 |
| 1.2 灰葡萄孢的分类地位和形态特征 | 第11-12页 |
| 1.3 灰霉病的病害循环 | 第12页 |
| 1.4 灰葡萄孢的致病因子 | 第12-16页 |
| 1.4.1 毒素和小分子蛋白类 | 第13-14页 |
| 1.4.2 次级代谢产物 | 第14-16页 |
| 1.5 影响灰葡萄孢菌核形成的相关因素 | 第16页 |
| 1.6 灰霉病的防治 | 第16-18页 |
| 1.7 基因功能研究策略 | 第18页 |
| 1.8 CVNH结构域 | 第18-19页 |
| 1.9 MFS超家族蛋白 | 第19-20页 |
| 2 本实验研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 灰葡萄孢基因的敲除及验证 | 第21-44页 |
| 1 实验材料和方法 | 第21-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1 菌株 | 第21页 |
| 1.1.2 培养基 | 第21-22页 |
| 1.1.3 载体 | 第22页 |
| 1.1.4 质粒提取试剂 | 第22页 |
| 1.1.5 其他试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.6 仪器和设备 | 第23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 1.2.1 灰葡萄孢BC1G_05726 基因的序列分析 | 第23页 |
| 1.2.2 灰葡萄孢BC1G_09891、BC1G_14375 和BC1G_12206 基因的序列分析 | 第23-24页 |
| 1.2.3 灰葡萄孢BC1G_05726、BC1G_09891、BC1G_14375 和BC1G_12206基因的表达分析 | 第24-26页 |
| 1.2.3.1 基因组总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 1.2.3.2 c DNA的合成 | 第25页 |
| 1.2.3.3 RT-PCR检测基因表达 | 第25-26页 |
| 2 基因的敲除及验证 | 第26-34页 |
| 2.1 基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2 KS1004质粒的提取 | 第27页 |
| 2.3 同源重组的原理 | 第27-28页 |
| 2.4 敲除转化片段的获得 | 第28-29页 |
| 2.5 融合PCR扩增转化片段 | 第29-30页 |
| 2.6 PEG介导的灰葡萄孢原生质体转化 | 第30-31页 |
| 2.6.1 灰葡萄孢原生质体的制备 | 第30-31页 |
| 2.6.2 PEG介导的转化 | 第31页 |
| 2.6.3 敲除转化子的单孢纯化 | 第31页 |
| 2.7 敲除转化子的PCR验证 | 第31页 |
| 2.8 敲除转化子的Southern Bolt验证 | 第31-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-44页 |
| 3.1 灰葡萄孢BC1G_05726、BC1G_09891、BC1G_14375 和BC1G_12206 基因序列分析 | 第34-35页 |
| 3.2 灰葡萄孢基因BC1G_14375、BC1G_09891、BC1G_12206 和Bc CVNH的表达模式分析 | 第35-36页 |
| 3.3 BC1G_09891、BC1G_14375、BC1G_12206 和Bc CVNH敲除转化子的获得及验证 | 第36-42页 |
| 3.3.1 Bc CVNH敲除转化子的获得及验证 | 第36-39页 |
| 3.3.2 BC1G_09891 敲除转化子的获得及验证 | 第39-40页 |
| 3.3.3 BC1G_14375 敲除转化子的获得及验证 | 第40-41页 |
| 3.3.4 BC1G_12206 敲除转化子的获得及验证 | 第41-42页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 灰葡萄孢中Bc CVNH、BC1G_14375、BC1G_09891 和BC1G_12206 基因功能的初步探究 | 第44-62页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 实验材料 | 第44页 |
| 1.1.1 实验菌株 | 第44页 |
| 1.1.2 培养基 | 第44页 |
| 1.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 1.2.1 菌丝生长速度测定 | 第44页 |
| 1.2.2 转化子菌丝尖端形态 | 第44-45页 |
| 1.2.3 转化子产孢量测定 | 第45页 |
| 1.2.4 转化子菌落形态观察 | 第45页 |
| 1.2.5 转化子菌核产量测定 | 第45页 |
| 1.2.6 转化子致病力测定 | 第45-46页 |
| 1.2.7 转化子产酸能力的测定 | 第46页 |
| 1.2.8 转化子菌核萌发率测定 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-60页 |
| 2.1 Bc CVNH敲除突变体的表型分析 | 第46-53页 |
| 2.1.1 Bc CVNH敲除转化子菌落形态 | 第46-47页 |
| 2.1.2 Bc CVNH敲除突变体的菌丝生长速度 | 第47-48页 |
| 2.1.3 Bc CVNH敲除突变体的菌丝尖端形态 | 第48页 |
| 2.1.4 Bc CVNH敲除突变体分生孢子产生情况 | 第48-49页 |
| 2.1.5 Bc CVNH敲除突变体的菌落形态及菌核形成 | 第49-51页 |
| 2.1.6 Bc CVNH敲除突变体的致病力测定 | 第51-52页 |
| 1.2.7 转化子产酸量能力的测定 | 第52-53页 |
| 2.2 BC1G_09891 敲除突变体的表型分析 | 第53-58页 |
| 2.2.1 BC1G_09891 敲除突变体的菌丝生长速度 | 第53页 |
| 2.2.2 BC1G_09891 敲除突变体的菌丝尖端形态 | 第53-54页 |
| 2.2.3 BC1G_09891 敲除突变体分生孢子产生情况 | 第54页 |
| 2.2.4 BC1G_09891 敲除突变体的菌落形态及菌核形成 | 第54-56页 |
| 2.2.5 BC1G_09891 敲除突变体菌核萌发率测定 | 第56-57页 |
| 2.2.6 BC1G_09891 敲除突变体的致病力测定 | 第57-58页 |
| 2.2.7 转化子产酸量能力的测定 | 第58页 |
| 2.3 BC1G_12206 和BC1G_14375 基因敲除突变体表型分析 | 第58-60页 |
| 2.3.1 BC1G_14375 和BC1G_12206 敲除突变体的菌落形态及菌核形成 | 第58-60页 |
| 3 小结与讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
