| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 真菌细胞壁的化学组成 | 第11-20页 |
| 1.1 细胞壁的组成 | 第11-13页 |
| 1.2 细胞壁的的多糖结构 | 第13-19页 |
| 1.3 细胞壁的蛋白结构 | 第19-20页 |
| 2 真菌细胞壁蛋白Mad1的功能及研究进展 | 第20-21页 |
| 3 本文研究思路、内容及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 粗糙脉孢菌NcMad1基因敲除及回补菌株的构建 | 第23-61页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第23-27页 |
| 2.1 实验菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.2 主要试剂及培养基 | 第23-26页 |
| 2.3 实验室用生化试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| 2.4 实验仪器和设备 | 第27页 |
| 3 实验方法 | 第27-44页 |
| 3.1 粗糙脉孢菌细胞壁NcMad1蛋白编码基因和氨基酸序列来源 | 第27页 |
| 3.2 序列比对分析软件 | 第27-28页 |
| 3.3 粗糙脉胞菌基因组DNA提取 | 第28页 |
| 3.4 胶回收程序 | 第28-29页 |
| 3.5 基因敲除载体pNcMad1-KO的构建 | 第29-32页 |
| 3.6 化学转化大肠杆菌DH5α | 第32页 |
| 3.7 质粒提取步骤 | 第32-33页 |
| 3.8 敲除载体转化农杆菌AGL1 | 第33页 |
| 3.9 农杆菌介导敲除质粒转化粗糙脉孢菌 | 第33-34页 |
| 3.10 NcMad1基因敲除株转化子验证 | 第34-39页 |
| 3.11 ΔNcMad1基因敲除菌株和301-6杂交 | 第39-40页 |
| 3.12 AoMad1基因和NcMad1基因表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.13 电穿孔法转化粗糙脉胞菌 | 第42-43页 |
| 3.14 表达载体pT5-AoMad1/NcMad1-His电转粗糙脉孢菌以及转化子的验证 | 第43页 |
| 3.15 转化子抗性和稳定性检测 | 第43-44页 |
| 4 实验结果 | 第44-57页 |
| 4.1 粗糙脉胞菌细胞壁蛋白NcMad1序列分析 | 第44页 |
| 4.2 NcMad1蛋白序列比对 | 第44-46页 |
| 4.3 NcMad1基因敲除载体构建 | 第46-48页 |
| 4.4 农杆菌AGL1介导敲除载体敲除基因NcMad1 | 第48-49页 |
| 4.5 ΔNcMad1转化子验证 | 第49-51页 |
| 4.6 回补质粒pT5-AoMad1/NcMad1-His的构建 | 第51-53页 |
| 4.7 杂交 | 第53-55页 |
| 4.8 NcMad1基因回补菌株、AoMad1过表达菌株、AoMad1异源表达菌株的获得 | 第55-56页 |
| 4.9 粗糙脉孢菌转化子潮霉素抗性和His-3营养型稳定性检测 | 第56-57页 |
| 5 结论和讨论 | 第57-61页 |
| 第三章 粗糙脉孢菌野生菌株与ΔNcMad1敲除株以及其他菌株的表型特征比较和分析 | 第61-69页 |
| 1 前言 | 第61页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第61页 |
| 2.1 实验菌株 | 第61页 |
| 2.2 主要培养基 | 第61页 |
| 2.3 主要试剂 | 第61页 |
| 3 实验方法 | 第61-62页 |
| 3.1 透射电镜观察细胞壁外的糖蛋白 | 第61-62页 |
| 3.2 形态观察和生长速率测定 | 第62页 |
| 3.3 产孢能力及孢子形态的比较 | 第62页 |
| 3.4 逆境生长情况比较 | 第62页 |
| 4 实验结果 | 第62-67页 |
| 4.1 透射电镜观察细胞壁周围的糖蛋白 | 第62-63页 |
| 4.2 生长速率测定和形态观察 | 第63-65页 |
| 4.3 产孢能力比较 | 第65-66页 |
| 4.4 抗逆性比较 | 第66-67页 |
| 5 结论与讨论 | 第67-69页 |
| 全文小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录 | 第78-84页 |
| 附录1 论文中使用的缩写及中英文对照 | 第78-79页 |
| 附录2 论文中使用引物序列 | 第79-81页 |
| 附录3 常用的数据库和网上生物学资源 | 第81-82页 |
| 附录4 实验中使用菌株和载体的性质和图谱 | 第82-83页 |
| 附录5 硕士阶段发表或参与撰写的论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
