| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-37页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的研究进展 | 第19-21页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第19页 |
| ·PRRS的流行病学特点 | 第19-20页 |
| ·PRRS的临床症状 | 第20页 |
| ·PRRS的检测 | 第20-21页 |
| ·PRRS的防制 | 第21页 |
| ·PRRSV的病原学特征及研究进展 | 第21-31页 |
| ·PRRSV的分类地位 | 第21页 |
| ·PRRSV的基本结构 | 第21-22页 |
| ·PRRSV的理化特性 | 第22页 |
| ·PRRSV基因组结构 | 第22-24页 |
| ·PRRSV 基因组的复制与亚基因组RNA的转录 | 第24-25页 |
| ·PRRSV编码的非结构蛋白质及其功能 | 第25-26页 |
| ·PRRSV编码的结构蛋白质及其功能 | 第26-29页 |
| ·PRRSV的细胞增长特性 | 第29页 |
| ·PRRSV的致病机理 | 第29-30页 |
| ·PRRSV感染的免疫学 | 第30-31页 |
| ·PRRSV感染性克隆的研究策略及进展 | 第31-35页 |
| ·高致病性PRRSV HuN4-F112 株感染性克隆的构建策略 | 第32-33页 |
| ·反向遗传在PRRSV基因组研究中的应用 | 第33页 |
| ·反向遗传在PRRSV致病机理中的应用 | 第33-34页 |
| ·反向遗传在PRRSV 表达外源基因的研究进展 | 第34-35页 |
| ·研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒HUN4-F112 弱毒株NSP2 复制非必需区的鉴定 | 第37-56页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| ·材料与方法 | 第38-50页 |
| ·病毒株、细胞及载体 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·PRRSV HuN4-F112 株缺失NSP2 序列感染性cDNA克隆的构建 | 第38-39页 |
| ·PRRSV HuN4-F112 株缺失NSP2 区域的设计 | 第39页 |
| ·pSK-HuN4-F112-ABC-Δ的构建 | 第39-42页 |
| ·含有NSP2 蛋白缺失区域全长cDNA克隆的构建 | 第42-43页 |
| ·PRRSV HuN4-F112 株缺失NSP2 蛋白病毒的拯救 | 第43-45页 |
| ·缺失拯救病毒的鉴定 | 第45-47页 |
| ·缺失拯救病毒生物学分析 | 第47页 |
| ·缺失拯救病毒的Northern Blot分析 | 第47-50页 |
| ·结果 | 第50-54页 |
| ·缺失拯救病毒的细胞病变(cytopathic effect , CPE)观察 | 第50页 |
| ·缺失拯救病毒的Nsp2 基因的RT-PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·缺失拯救病毒的分子标记基因Mlu Ι酶切鉴定及测序分析 | 第51-52页 |
| ·拯救病毒的IFA分析 | 第52页 |
| ·缺失拯救病毒细胞的TCID_50测定结果 | 第52-53页 |
| ·缺失拯救病毒细胞的空斑检测结果 | 第53页 |
| ·缺失拯救病毒多步生长曲线分析 | 第53-54页 |
| ·缺失拯救病毒的Northern Blot分析 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒HUN4-F112 弱毒株NSP2 区表达NDV NP基因的研究 | 第56-72页 |
| 摘要 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-64页 |
| ·病毒株、细胞及载体 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57-58页 |
| ·试验动物 | 第58页 |
| ·NDV NP49 多克隆抗体的制备 | 第58-59页 |
| ·含有标记基因的PRRSV HuN4-F112 株感染性cDNA克隆的构建 | 第59-62页 |
| ·两株含有插入NDV NP49 基因的PRRSV的拯救 | 第62-63页 |
| ·两株含有插入NDV NP49 基因拯救病毒的鉴定 | 第63页 |
| ·两株含有插入NDV NP49 基因拯救病毒的生物学分析 | 第63-64页 |
| ·拯救病毒的Northern Blot分析 | 第64页 |
| ·拯救病毒外源基因稳定性的检测 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-71页 |
| ·NDV NP49 抗体的获得 | 第64-65页 |
| ·拯救病毒的细胞病变观察 | 第65-66页 |
| ·拯救病毒的Nsp2 基因的RT-PCR鉴定 | 第66-67页 |
| ·拯救病毒的分子标记基因Mlu Ι酶切鉴定及测序分析 | 第67页 |
| ·拯救病毒的IFA分析 | 第67-68页 |
| ·拯救病毒的TCID_50测定结果 | 第68页 |
| ·拯救病毒的空斑检测结果 | 第68-69页 |
| ·拯救病毒多步生长曲线分析 | 第69页 |
| ·拯救病毒的Northern Blot分析 | 第69-70页 |
| ·拯救病毒的遗传稳定性分析 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒 HUN4-F112 弱毒株NSP2 区表达CSFV E2 表位的研究 | 第72-86页 |
| 摘要 | 第72-73页 |
| ·材料与方法 | 第73-78页 |
| ·病毒株、细胞及载体 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器设备 | 第73-74页 |
| ·含有E2 表位基因的PRRSV HuN4-F112 株感染性cDNA克隆的构建 | 第74-76页 |
| ·两株含有插入CSFV E2 蛋白优势抗原表位基因的PRRSV的拯救 | 第76-77页 |
| ·两株含有插入CSFV E2 蛋白优势抗原表位基因拯救病毒的鉴定 | 第77-78页 |
| ·两株含有插入CSFV E2 蛋白优势抗原表位基因拯救病毒的生物学分析59 | 第78页 |
| ·拯救病毒的Northern Blot分析 | 第78页 |
| ·拯救病毒外源基因稳定性的检测 | 第78页 |
| ·结果 | 第78-84页 |
| ·拯救病毒的细胞病变观察 | 第78-79页 |
| ·拯救病毒的Nsp2 基因的RT-PCR鉴定 | 第79-80页 |
| ·拯救病毒的分子标记基因Mlu Ι酶切鉴定及测序分析 | 第80-81页 |
| ·拯救病毒的IFA分析 | 第81-82页 |
| ·拯救病毒的TCID50测定结果 | 第82页 |
| ·拯救病毒的空斑检测结果 | 第82-83页 |
| ·拯救病毒多步生长曲线分析 | 第83页 |
| ·拯救病毒的Northern Blot分析 | 第83-84页 |
| ·拯救病毒的遗传稳定性分析 | 第84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| 第五章 猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程标记疫苗的免疫效力试验 | 第86-97页 |
| 摘要 | 第86-87页 |
| ·材料 | 第87-90页 |
| ·试验动物 | 第87页 |
| ·细胞和毒株 | 第87页 |
| ·主要试剂检测试剂盒 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| ·两株标记病毒种子库的建立 | 第87页 |
| ·试验分组及免疫剂量 | 第87-88页 |
| ·免疫后攻毒及攻毒剂量 | 第88页 |
| ·血清和病料的采集 | 第88页 |
| ·体温的测定以及仔猪状态的观察 | 第88页 |
| ·血清中病毒含量的测定 | 第88页 |
| ·血清中PRRSV N蛋白抗体水平检测 | 第88-89页 |
| ·血清中NDV NP49 蛋白抗体水平检测 | 第89页 |
| ·血清中缺失 25aa多肽抗体水平检测 | 第89-90页 |
| ·IFA回归试验检测NDV NP49 抗体 | 第90页 |
| ·结果 | 第90-95页 |
| ·两株标记病毒种子批病毒的检验 | 第90页 |
| ·攻毒后猪的体温变化情况及临床特征观察结果 | 第90-91页 |
| ·猪血清中病毒含量的检测结果 | 第91-92页 |
| ·猪血清中N蛋白抗体检测结果 | 第92页 |
| ·猪血清中NP49 蛋白抗体检测结果 | 第92-93页 |
| ·猪血清中缺失 25aa多肽抗体检测结果 | 第93页 |
| ·免疫保护率统计结果 | 第93-94页 |
| ·IFA回归试验检测NDV NP49 抗体结果 | 第94页 |
| ·组织病理学检测结果 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| 全文结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 作者简介 | 第110-111页 |
