| 中文摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-28页 |
| 1.1 熊果苷概述 | 第17-21页 |
| 1.1.1 熊果苷简介 | 第17-18页 |
| 1.1.2 熊果苷的理化性质 | 第18页 |
| 1.1.3 熊果苷的美白机理 | 第18-20页 |
| 1.1.4 熊果苷的应用 | 第20-21页 |
| 1.1.4.1 化妆品 | 第20-21页 |
| 1.1.4.2 其他用途 | 第21页 |
| 1.2 熊果苷的制备方法概述 | 第21-27页 |
| 1.2.1 熊果苷的传统制备方法 | 第21-23页 |
| 1.2.1.1 天然产物提取法 | 第21-22页 |
| 1.2.1.2 植物组织培养法 | 第22-23页 |
| 1.2.1.3 有机合成法 | 第23页 |
| 1.2.2 熊果苷的高效制备方法 | 第23-27页 |
| 1.2.2.1 酶转化法 | 第24-26页 |
| 1.2.2.2 全细胞转化法 | 第26-27页 |
| 1.3 选题的目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 淀粉蔗糖酶的表达、纯化及活性测定 | 第28-51页 |
| 2.1 材料和方法 | 第28-44页 |
| 2.1.1 试剂、仪器和菌种 | 第28-30页 |
| 2.1.2 菌株的培养及分子克隆方法 | 第30-38页 |
| 2.1.2.1 培养基的配制 | 第30页 |
| 2.1.2.2 标准溶液的配制 | 第30-33页 |
| 2.1.2.3 琼脂糖凝胶的配制 | 第33页 |
| 2.1.2.4 SDS-PAGE的配制和电泳检测 | 第33-34页 |
| 2.1.2.5 大肠杆菌的培养 | 第34-35页 |
| 2.1.2.6 PCR扩增及其产物回收 | 第35页 |
| 2.1.2.7 双酶切及琼脂糖凝胶回收 | 第35-36页 |
| 2.1.2.8 连接 | 第36页 |
| 2.1.2.9 转化 | 第36-37页 |
| 2.1.2.10 阳性克隆鉴定 | 第37-38页 |
| 2.1.3 淀粉蔗糖酶的构建和表达 | 第38-41页 |
| 2.1.3.1 DrAS-pet28a-rosetta的构建与表达 | 第38-40页 |
| 2.1.3.2 DrAS-pYB1s-BW25113的构建与表达 | 第40-41页 |
| 2.1.4 淀粉蔗糖酶的纯化 | 第41-43页 |
| 2.1.4.1 目的蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 2.1.4.2 目的蛋白的保存 | 第42页 |
| 2.1.4.3 目的蛋白的浓度测定 | 第42-43页 |
| 2.1.5 淀粉蔗糖酶的酶活测定 | 第43-44页 |
| 2.1.5.1 二硝基水杨酸(DNS)的配制 | 第44页 |
| 2.1.5.2 果糖标准曲线的绘制 | 第44页 |
| 2.1.5.3 淀粉蔗糖酶酶活的测定 | 第44页 |
| 2.1.5.4 淀粉蔗糖酶酶活的计算 | 第44页 |
| 2.2 结果与分析 | 第44-49页 |
| 2.2.1 淀粉蔗糖酶的表达 | 第44-48页 |
| 2.2.1.1 DrAS-pet28a-rosetta的表达 | 第44-47页 |
| 2.2.1.2 DrAS-pYB1s-BW25113的表达 | 第47-48页 |
| 2.2.2 淀粉蔗糖酶的纯化 | 第48页 |
| 2.2.3 淀粉蔗糖酶的酶活测定 | 第48-49页 |
| 2.3 本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 全细胞催化法生产α-熊果苷以及转化条件的优化 | 第51-63页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-54页 |
| 3.1.1 材料 | 第51页 |
| 3.1.2 比较两株基因工程菌催化生产α熊果苷的能力大小 | 第51页 |
| 3.1.3 优化全细胞催化法合成α熊果苷的转化条件 | 第51-54页 |
| 3.1.3.1 Vc浓度 | 第52页 |
| 3.1.3.2 蔗糖浓度 | 第52页 |
| 3.1.3.3 转化温度 | 第52页 |
| 3.1.3.4 转化时间 | 第52-53页 |
| 3.1.3.5 对苯二酚浓度 | 第53页 |
| 3.1.3.6 细胞浓度 | 第53页 |
| 3.1.3.7 不同温度下表达的菌体 | 第53页 |
| 3.1.3.8 二次转化 | 第53-54页 |
| 3.1.3.9 冻存细胞转化 | 第54页 |
| 3.1.4 α-熊果苷的检测 | 第54页 |
| 3.1.4.1 HPLC法 | 第54页 |
| 3.1.4.2 TLC法 | 第54页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第54-62页 |
| 3.2.1 α-熊果苷和对苯二酚标准曲线的绘制 | 第54-55页 |
| 3.2.2 两株基因工程菌催化生产α-熊果苷的能力大小比较 | 第55页 |
| 3.2.3 全细胞催化法合成α-熊果苷转化条件的优化结果 | 第55-62页 |
| 3.2.3.1 不同浓度Vc对α-熊果苷产量的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.3.2 蔗糖浓度对反应转化率的影响 | 第56-57页 |
| 3.2.3.3 转化温度对反应转化率的影响 | 第57页 |
| 3.2.3.4 反应时间对反应转化率的影响 | 第57-59页 |
| 3.2.3.5 对苯二酚浓度对α-熊果苷产量的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.3.6 不同细胞浓度对反应转化率的影响 | 第60页 |
| 3.2.3.7 不同温度下表达的酶对反应转化率的影响 | 第60-61页 |
| 3.2.3.8 二次转化对反应转化率的影响 | 第61页 |
| 3.2.3.9 用冻存细胞转化对反应转化率的影响 | 第61-62页 |
| 3.3 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 α-熊果苷的分离纯化和结构鉴定 | 第63-72页 |
| 4.1 α-熊果苷的分离纯化 | 第63-69页 |
| 4.1.1 材料与仪器设备 | 第63页 |
| 4.1.2 分离纯化方法 | 第63-65页 |
| 4.1.2.1 大孔吸附树脂柱层析的操作 | 第63-64页 |
| 4.1.2.2 硅胶柱层析的操作 | 第64-65页 |
| 4.1.3 结果与讨论 | 第65-69页 |
| 4.1.3.1 大孔吸附树脂H107进行一步纯化 | 第65-67页 |
| 4.1.3.2 硅胶柱进行二步纯化 | 第67-69页 |
| 4.2 核磁共振鉴定化学结构 | 第69-70页 |
| 4.2.1 仪器及试剂 | 第69页 |
| 4.2.2 NMR谱解析 | 第69-70页 |
| 4.2.2.1 化学位移归属 | 第69-70页 |
| 4.2.2.2 数据解析 | 第70页 |
| 4.3 本章小结 | 第70-72页 |
| 总结与创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 在读期间参与发表文章 | 第79-80页 |
| 学化论文评阅及答辩情况表 | 第80页 |
