| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 嵌合型抗原受体T细胞（CAR-T）概念及研究进展 | 第13-21页 |
| 1.1 嵌合型抗原受体T细胞的概念 | 第13-15页 |
| 1.2 T细胞的抗肿瘤机制 | 第15-16页 |
| 1.3 CAR-T疗法的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 间皮素作为肿瘤治疗靶点的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 间皮素的发现及特征 | 第17-18页 |
| 1.4.2 以间皮素为靶点的探索 | 第18页 |
| 1.4.3 间皮素CAR-T的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.4 间皮素CAR-T细胞的脱靶毒性 | 第19页 |
| 1.5 PB转座子 | 第19-20页 |
| 1.6 本课题的研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 靶向间皮素的嵌合型抗原受体修饰的T细胞（mesoCAR-T）构建 | 第21-33页 |
| 2.1 实验器材 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.5 实验试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 大量抽提载体质粒PNBS328、pGH-mesoCAR | 第23-24页 |
| 2.2.2 酶切、连接、转化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 小量抽提质粒、酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.4 电转染获得mesoCAR-T细胞 | 第26页 |
| 2.2.5 检测T细胞中mesoCAR的表达 | 第26-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-32页 |
| 2.3.1 mesoCAR基因结构示意图 | 第28-29页 |
| 2.3.2 PNBS328-mesoCAR质粒构建结果 | 第29-30页 |
| 2.3.3 T细胞形态 | 第30页 |
| 2.3.4 转染效率检测结果 | 第30-32页 |
| 2.4 结果分析与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 间皮素高表达肝癌细胞株的筛选和人工构建 | 第33-41页 |
| 3.1 实验器材 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第33页 |
| 3.1.2 引物设计 | 第33页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第33页 |
| 3.1.4 实验试剂的配置 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 各肿瘤细胞系的复苏及培养 | 第34-35页 |
| 3.2.2 RT-PCR检测各细胞系中间皮素的表达 | 第35-36页 |
| 3.2.3 Western Bolt检测各细胞系中间皮素的表达 | 第36页 |
| 3.2.4 构建间皮素高表达细胞株─293-meso | 第36-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-39页 |
| 3.3.1 各肿瘤细胞株间皮素抗原的RT-PCR结果 | 第38页 |
| 3.3.2 各肿瘤细胞株间皮素抗原的WB检测结果 | 第38-39页 |
| 3.3.3 构建的 293-meso细胞 | 第39页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 mesoCAR-T细胞的功能分析 | 第41-51页 |
| 4.1 实验器材 | 第41页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第41页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 流式检测mesoCAR-T细胞表型 | 第41页 |
| 4.2.2 流式检测mesoCAR-T细胞胞内细胞因子 | 第41-42页 |
| 4.2.3 检测mesoCAR-T细胞的体外杀伤能力 | 第42页 |
| 4.2.4 LDH法检测CAR-T细胞的杀伤能力 | 第42-43页 |
| 4.2.5 Elisa检测共培养条件下CAR-T细胞IFN-γ的分泌 | 第43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-50页 |
| 4.3.1 抗原刺激下mesoCAR-T细胞表型 | 第43-45页 |
| 4.3.2 实时监测系统检测mesoCAR-T对肿瘤细胞株的杀伤作用 | 第45-47页 |
| 4.3.3 LDH法检测mesoCAR-T细胞对K562-meso的杀伤 | 第47-48页 |
| 4.3.4 RTCA检测mesoCAR-T细胞对239和 293-meso的杀伤 | 第48页 |
| 4.3.5 检测mesoCAR-T细胞因子的流式结果 | 第48-49页 |
| 4.3.6 mesoCAR-T细胞与肿瘤细胞共培养IFN-γ的分泌 | 第49-50页 |
| 4.4 结果分析与讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 SMMC-7721 小鼠移植瘤模型实验 | 第51-53页 |
| 5.1 实验材料 | 第51页 |
| 5.2 实验方法 | 第51页 |
| 5.3 实验结果 | 第51-52页 |
| 5.4 结果分析与讨论 | 第52-53页 |
| 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
