| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 基因组编辑技术 | 第11-16页 |
| 1.1.1 锌指核酸酶技术 | 第12-13页 |
| 1.1.2 类转录激活因子效应物核酸酶技术 | 第13-14页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas9技术 | 第14-16页 |
| 1.2 细胞DNA双链断裂的两种修复 | 第16-18页 |
| 1.3 基因打靶技术 | 第18页 |
| 1.4 检测基因组编辑效率的方法 | 第18-19页 |
| 1.5 印记基因Meg3 | 第19-20页 |
| 1.6 小鼠ES细胞和 293T细胞 | 第20-21页 |
| 1.7 细胞转染 | 第21-22页 |
| 1.8 研究的主要内容及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 实验细胞系 | 第23页 |
| 2.1.2 实验载体 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5 实验试剂的配制 | 第25-27页 |
| 2.1.6 实验用引物 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-43页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第29-35页 |
| 2.2.2 293T细胞和ES细胞的培养及检测 | 第35-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-55页 |
| 3.1 载体构建 | 第43-47页 |
| 3.1.1 Meg3基因3'和5'DNA片段制备 | 第43-44页 |
| 3.1.2 打靶位点的选取及gRNA构建 | 第44-45页 |
| 3.1.3 同源重组载体构建 | 第45-47页 |
| 3.2 239T稳转细胞系建立 | 第47-49页 |
| 3.3 239T细胞检测结果 | 第49-51页 |
| 3.4 ES细胞检测结果 | 第51-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9系统介导的同源重组效率检测 | 第55-56页 |
| 4.2 Meg3基因、ES细胞、293T细胞的选取以及检测方法的建立 | 第56-59页 |
| 5 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第69-70页 |