| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1.前言 | 第8-18页 |
| 1.1 表观遗传学 | 第8-10页 |
| 1.1.1 基因组印记 | 第8-9页 |
| 1.1.2 X染色体失活 | 第9-10页 |
| 1.2 DNA甲基化与羟甲基化 | 第10-15页 |
| 1.2.1 DNA甲基化及其作用 | 第10-12页 |
| 1.2.2 DNA甲基化的检测方法 | 第12-13页 |
| 1.2.3 DNA羟甲基化和组蛋白H3 K27me3修饰相关性研究进展 | 第13页 |
| 1.2.4 TET蛋白家族的基本特征及其作用 | 第13-14页 |
| 1.2.5 羟甲基化的检测方法 | 第14-15页 |
| 1.3 体细胞重编程 | 第15页 |
| 1.3.1 体细胞重编程技术及体细胞克隆动物存在的问题 | 第15页 |
| 1.4 立题依据和研究意义 | 第15-18页 |
| 2.实验材料和方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 常用试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.4 分析工具软件及网站 | 第20页 |
| 2.1.5 实验用引物序列 | 第20-21页 |
| 2.2 实验步骤 | 第21-28页 |
| 2.2.1 实验材料的选取 | 第21页 |
| 2.2.2 基因组DNA的提取和纯度检验 | 第21-22页 |
| 2.2.3 单个位点DNA甲基化和羟甲基化检测 | 第22-28页 |
| 3.结果与分析 | 第28-40页 |
| 3.1 利用高效液相色谱检测 5mC总含量方法的建立 | 第28-29页 |
| 3.2 利用LC-MS检测基因组中 5hmC总含量方法的建立 | 第29-30页 |
| 3.3 不同供体核存活和死亡克隆牛基因组DNA 5mC和 5hmC的检测 | 第30-32页 |
| 3.4 体细胞克隆猪基因组DNA 5mC和 5hmC的检测 | 第32-36页 |
| 3.5 体细胞克隆牛单基因位点DNA 5mC检测 | 第36-37页 |
| 3.6 单碱基分辨率的甲基化和羟甲基化方法的建立 | 第37-40页 |
| 4.讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 关于LC-MS测定中的干扰和校正 | 第40页 |
| 4.2 关于高效液相色谱的梯度洗脱 | 第40页 |
| 4.3 关于KRuO4处理 5hmC的讨论 | 第40-42页 |
| 5.结论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
