| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 前言 | 第11-12页 |
| 1.2 MSTN概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 MSTN的发现 | 第12页 |
| 1.2.2 MSTN的结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.2.3 MSTN在家畜改良上的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.4 MSTN对心肌细胞的作用 | 第14-15页 |
| 1.3 基因工程技术 | 第15-19页 |
| 1.3.1 RNAi技术 | 第15页 |
| 1.3.2 基因编辑 | 第15-17页 |
| 1.3.3 重组技术 | 第17-18页 |
| 1.3.4 荧光蛋白标记基因技术 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 试验细胞 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器设备及试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 试验载体 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.0 载体构建方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1 载体验证方法 | 第23-24页 |
| 2.2.2 酶切体系 | 第24页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.2.4 细胞电转染 | 第25-27页 |
| 2.2.5 阳性细胞的筛选甄别 | 第27-28页 |
| 2.2.6 PCR试验 | 第28-31页 |
| 2.2.7 Southern印迹和Western印迹甄别 | 第31-33页 |
| 第三章 试验结果 | 第33-47页 |
| 3.1 第一次打靶 | 第33-38页 |
| 3.1.1 Cas9/sgRNA1和donorDNA1载体验证 | 第33-35页 |
| 3.1.2 G418筛选与荧光标记甄别 | 第35页 |
| 3.1.3 PCR产物凝胶电泳及测序 | 第35-37页 |
| 3.1.4 Southern印迹 | 第37-38页 |
| 3.1.5 Western印迹 | 第38页 |
| 3.2 标记删除 | 第38-41页 |
| 3.2.1 pTurbo-Cre载体验证 | 第38-39页 |
| 3.2.2 荧光筛选甄别 | 第39-40页 |
| 3.2.3 PCR产物凝胶电泳 | 第40-41页 |
| 3.3 第二次打靶 | 第41-47页 |
| 3.3.1 Cas9/sgRNA2和donorDNA2载体验证 | 第41-42页 |
| 3.3.2 G418筛选及荧光标记甄别 | 第42-43页 |
| 3.3.3 PCR产物凝胶电泳及测序 | 第43-44页 |
| 3.3.4 长距离PCR产物凝胶电泳区分基因型 | 第44-45页 |
| 3.3.5 Western印迹 | 第45-47页 |
| 第四章 讨论与分析 | 第47-53页 |
| 4.1 试验材料选择 | 第47页 |
| 4.2 核酸酶介导的不同修复路径 | 第47-48页 |
| 4.3 删除标记 | 第48页 |
| 4.4 基因敲除技术的应用 | 第48-49页 |
| 4.5 试验过程 | 第49-51页 |
| 4.6 试验设计 | 第51页 |
| 4.7 MSTN失活细胞系用途 | 第51-52页 |
| 4.8 转染试剂对比 | 第52-53页 |
| 第五章 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |
