| 缩略词表 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 1 前言 | 第9-22页 |
| 1.1 课题的提出 | 第9-11页 |
| 1.2 研究进展 | 第11-21页 |
| 1.2.1 六种马铃薯病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒概述 | 第11-15页 |
| 1.2.1.1 马铃薯Y病毒(PVY) | 第11-12页 |
| 1.2.1.2 马铃薯X病毒(PVX) | 第12页 |
| 1.2.1.3 马铃薯卷叶病毒(PLRV) | 第12页 |
| 1.2.1.4 马铃薯S病毒(PVS) | 第12-13页 |
| 1.2.1.5 马铃薯M病毒(PVM) | 第13页 |
| 1.2.1.6 马铃薯A病毒(PVA) | 第13-14页 |
| 1.2.1.7 马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd) | 第14-15页 |
| 1.2.2 马铃薯病毒检测方法概述 | 第15-21页 |
| 1.2.2.1 生物学法(指示植物鉴定法) | 第15页 |
| 1.2.2.2 血清学法 | 第15-17页 |
| 1.2.2.2.1 夹心抗体酶联免疫反应DAS-ELISA | 第15-16页 |
| 1.2.2.2.2 快速免疫滤纸测定法 | 第16页 |
| 1.2.2.2.3 免疫胶体金技术 | 第16-17页 |
| 1.2.2.3 植物病毒电镜诊断 | 第17-19页 |
| 1.2.2.3.1 负染色法 | 第17页 |
| 1.2.2.3.2 超薄切片法 | 第17-18页 |
| 1.2.2.3.3 免疫吸附电镜术 | 第18-19页 |
| 1.2.2.4 生物化学法 | 第19-21页 |
| 1.2.2.4.1 核酸分子杂交 | 第19页 |
| 1.2.2.4.2 反向聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第19-20页 |
| 1.2.2.4.3 双链RNA电泳技术 | 第20页 |
| 1.2.2.4.4 聚合酶链式反应 | 第20-21页 |
| 1.3 本研究的目的及内容 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-26页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 马铃薯叶片RNA抽提纯化 | 第22页 |
| 2.2.2 m-RT-PCR特异性引物设计 | 第22-23页 |
| 2.2.3 确定最适的m-RT-PCR反应条件 | 第23页 |
| 2.2.4 反转录 | 第23页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.6 PCR产物检测 | 第23-24页 |
| 2.2.7 UNIQ-10柱式DNA片段回收 | 第24页 |
| 2.2.8 用氯化钙制备大肠杆菌感受态细胞 | 第24页 |
| 2.2.9 LB培养基的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.10 A-T克隆 | 第25页 |
| 2.2.11 测序 | 第25页 |
| 2.2.12 双夹心抗体酶联免疫反应DAS-ELISA | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-46页 |
| 3.1 单个病毒或类病毒PCR反应结果 | 第26-32页 |
| 3.1.1 总RNA的抽提 | 第26页 |
| 3.1.2 PVY,PVS,PVX,PLRV和PSTVd各病毒单个RT-PCR结果 | 第26-28页 |
| 3.1.3 PVA和PVM特异性引物的设计与筛选 | 第28-30页 |
| 3.1.4 PVA和PVM RT-PCR体系的初步建立与优化 | 第30-32页 |
| 3.1.4.1 PVA单个PCR体系的优化(退火温度、MgCl_2浓度、dNTPs浓度的优化) | 第30-31页 |
| 3.1.4.2 PVM单个PCR体系的优化(退火温度、MgCl_2浓度、dNTPs浓度的优化) | 第31-32页 |
| 3.2 各病毒PCR反应产物测序与确定 | 第32-38页 |
| 3.3 PVY,PVS,PVX,PLRV,PSTVd,PVA和PVM的m-RT-PCR反应体系的建立 | 第38-39页 |
| 3.3.1 总RNA抽提 | 第38页 |
| 3.3.2 m-RT-RCR扩增结果 | 第38-39页 |
| 3.4 m-RT-RCR反应体系的优化 | 第39-40页 |
| 3.5 各病毒单个PCR与m-RT-PCR反应结果比较 | 第40-41页 |
| 3.6 m-RT-PCR反应的灵敏度测验 | 第41-42页 |
| 3.7 m-RT-PCR与DAS-ELISA病毒检测特异性与准确性的比较 | 第42-45页 |
| 3.8 m-RT-PCR病毒检测试剂盒成分 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 总RNA抽提 | 第46页 |
| 4.2 PVA和PVM特异性引物的设计与筛选 | 第46页 |
| 4.3 PVA和PVM PCR体系的优化 | 第46-47页 |
| 4.4 m-RT-PCR体系的建立与优化 | 第47页 |
| 4.5 m-RT-PCR灵敏度分析 | 第47页 |
| 4.6 m-RT-PCR病毒检测试剂盒的研制及其应用前景分析 | 第47-48页 |
| 4.7 不足与展望 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录1:DAS-ELISA检测PVY的结果 | 第56-57页 |
| 附录2:DAS-ELISA检测PVX的结果 | 第57-58页 |
| 附录3:DAS-ELISA检测PLRV的结果 | 第58-59页 |
| 附录4:DAS-ELISA检测PVS的结果 | 第59-60页 |
| 附录5:DAS-ELISA检测PVA的结果 | 第60-61页 |
| 附录6:DAS-ELISA检测PVM的结果 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
