| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 几丁质概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 几丁质来源及分布 | 第11页 |
| 1.1.2 几丁质结构及性状 | 第11-12页 |
| 1.1.3 几丁质的应用 | 第12页 |
| 1.2 几丁质酶概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 几丁质酶的微生物来源 | 第12-13页 |
| 1.2.2 几丁质酶的类型 | 第13页 |
| 1.2.3 几丁质酶的酶学性质 | 第13页 |
| 1.2.4 几丁质酶活测定方法 | 第13-14页 |
| 1.2.5 几丁质降解酶酶解产物检测分析方法 | 第14页 |
| 1.2.6 几丁质酶的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 多糖裂解单加氧酶概述 | 第15-17页 |
| 1.3.1 多糖裂解单加氧酶的分类来源及研究进程 | 第15-16页 |
| 1.3.2 多糖裂解单加氧酶氧化作用特性 | 第16-17页 |
| 1.4 生物技术手段 | 第17-19页 |
| 1.4.1 PCR技术简述 | 第17-18页 |
| 1.4.2 RF clone原理及特点 | 第18页 |
| 1.4.3 引物设计方法 | 第18-19页 |
| 1.5 课题研究意义和研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.1 课题的研究意义 | 第19页 |
| 1.5.2 课题主要研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 BtLPMO10A的克隆表达 | 第20-35页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第20-22页 |
| 2.1.1 主要实验材料及试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 BtLPMO10A目的基因的克隆 | 第22-26页 |
| 2.2.1.1 BtLPMO10A基因的引物设计 | 第22页 |
| 2.2.1.2 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）基因组的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 BtLPMO10A目的基因的体外扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.1.4 BtLPMO10A基因重组质粒的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.1.5 BtLPMO10A重组质粒的转化 | 第25页 |
| 2.2.1.6 BtLPMO10A重组质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第26-29页 |
| 2.2.2.1 钙转法重组质粒的转化 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 BtLPMO10A的诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 BtLPMO10A的诱导条件摸索 | 第28-29页 |
| 2.2.3 BtLPMO10A的蛋白纯化及浓度测定 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 BtLPMO10A的蛋白纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.3.2 BtLPMO10A的蛋白浓度测定 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-35页 |
| 2.3.1 苏云金芽孢杆菌（Bt）基因组的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.2 BtLPMO10A目的基因的体外扩增 | 第31页 |
| 2.3.3 BtLPMO10A重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.4 BtLPMO10A重组质粒的测序结果 | 第32-33页 |
| 2.3.5 BtLPMO10A的诱导表达及纯化 | 第33页 |
| 2.3.6 BtLPMO10A的诱导条件摸索 | 第33-34页 |
| 2.3.7 BtLPMO10A的蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| 第三章 BtLPMO10A功能特性研究及氧化作用产物分析 | 第35-42页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第35页 |
| 3.1.1 主要实验材料及试剂 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 BtLPMO10A的抑菌活性研究 | 第35-36页 |
| 3.2.2 BtLPMO10A与不同底物相结合 | 第36页 |
| 3.2.3 BtLPMO10A氧化作用产物分析 | 第36-37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-42页 |
| 3.3.1 BtLPMO10A抑真菌结果 | 第37-38页 |
| 3.3.2 BtLPMO10A与底物结合结果 | 第38页 |
| 3.3.3 BtLPMO10A产物分析 | 第38-42页 |
| 3.3.3.1 BtLPMO10A作用 α-几丁质质谱分析 | 第38-39页 |
| 3.3.3.2 BtLPMO10A作用 β-几丁质质谱分析 | 第39-40页 |
| 3.3.3.3 BtLPMO10A作用微晶纤维素质谱分析 | 第40页 |
| 3.3.3.4 BtLPMO10A作用胶体几丁质质谱分析 | 第40-42页 |
| 第四章 BtLPMO10A与几丁质酶之间的相互协同作用 | 第42-56页 |
| 4.1 实验材料与设备 | 第42页 |
| 4.1.1 主要实验材料及试剂 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 4.2.1 几种还原剂的比较 | 第43页 |
| 4.2.2 抗坏血酸最适浓度摸索 | 第43-44页 |
| 4.2.3 不同底物在协同反应中的转化率研究 | 第44页 |
| 4.2.4 SmChiA与BtLPMO10A协同作用产物分析 | 第44-45页 |
| 4.2.4.1 选取 α-几丁质为底物 | 第44页 |
| 4.2.4.2 选取 β-几丁质为底物 | 第44-45页 |
| 4.2.5 SmChiB与BtLPMO10A协同作用产物分析 | 第45页 |
| 4.2.5.1 选取 α-几丁质为底物 | 第45页 |
| 4.2.5.2 选取 β-几丁质为底物 | 第45页 |
| 4.2.6 SmChiC与BtLPMO10A协同作用产物分析 | 第45-46页 |
| 4.2.6.1 选取 α-几丁质为底物 | 第45-46页 |
| 4.2.6.2 选取 β-几丁质为底物 | 第46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-56页 |
| 4.3.1 几种还原剂在协同反应中的效用 | 第47-48页 |
| 4.3.2 抗坏血酸最适浓度 | 第48页 |
| 4.3.3 不同底物在协同反应中的转化率 | 第48-49页 |
| 4.3.4 SmChiA与BtLPMO10A协同作用产物分析结果 | 第49-52页 |
| 4.3.4.1 选取 α-几丁质为底物 | 第50-51页 |
| 4.3.4.2 选取 β-几丁质为底物 | 第51-52页 |
| 4.3.5 SmChiB与BtLPMO10A协同作用产物分析结果 | 第52-54页 |
| 4.3.5.1 选取 α-几丁质为底物 | 第52-53页 |
| 4.3.5.2 选取 β-几丁质为底物 | 第53-54页 |
| 4.3.6 SmChiC与BtLPMO10A协同作用产物分析结果 | 第54-56页 |
| 4.3.6.1 选取 α-几丁质为底物 | 第54-55页 |
| 4.3.6.2 选取 β-几丁质为底物 | 第55-56页 |
| 第五章 结论与展望 | 第56-58页 |
| 5.1 本文主要结论 | 第56-57页 |
| 5.2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录A | 第64页 |
