| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 文献综述 | 第15-30页 |
| 1.1 水稻细菌性褐条病的概况 | 第15-18页 |
| 1.1.1 水稻细菌性褐条病的发生与危害 | 第15-16页 |
| 1.1.2 水稻细菌性褐条病的病原菌 | 第16-17页 |
| 1.1.3 水稻细菌性褐条病病害症状 | 第17-18页 |
| 1.1.4 水稻细菌性褐条病的发病条件及侵染循 | 第18页 |
| 1.2 病原细菌的分泌系统 | 第18-22页 |
| 1.3 病原细菌相关的致病因子 | 第22-24页 |
| 1.3.1 生物膜 | 第22-23页 |
| 1.3.2 胞外酶 | 第23-24页 |
| 1.3.3 游动性 | 第24页 |
| 1.4 壳聚糖抑菌活性及机制研究进展 | 第24-27页 |
| 1.4.1 壳聚糖的性质 | 第24-25页 |
| 1.4.2 壳聚糖抑菌性质的应用研究进展 | 第25-27页 |
| 1.4.3 壳聚糖抗菌活性机理研究进展 | 第27页 |
| 1.5 本论文的研究目的和意义 | 第27-30页 |
| 2 水稻细菌性褐条病菌六型分泌系统相关基因lipo和pppA突变体构建 | 第30-47页 |
| 2.1 实验准备 | 第30-31页 |
| 2.1.1 所用菌株与质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要所用试剂(盒)、酶及抗生素 | 第31页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 实验准备 | 第31-32页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第32-34页 |
| 2.2.3 lipo和pppA基因目的片段的扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.4 含Kan片段的pJP5603质粒的提取 | 第35页 |
| 2.2.5 的片段和质粒的双酶切 | 第35页 |
| 2.2.6 重组质粒的构建 | 第35页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态的制备及热击转化 | 第35-37页 |
| 2.2.7.1 大肠杆菌的培养 | 第36页 |
| 2.2.7.2 大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第36页 |
| 2.2.7.3 连接体的热击转化 | 第36-37页 |
| 2.2.8 重组质粒转化子的筛选与鉴定 | 第37页 |
| 2.2.9 电击感受态的制备与电击转化 | 第37-39页 |
| 2.2.9.1 电击感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.9.2 电击转化 | 第38-39页 |
| 2.2.10 基因突变转化子的筛选与鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.10.1 验证转化子菌株为A.oryzae | 第39-40页 |
| 2.2.10.2 pJP5603保守特异性引物的验证 | 第40页 |
| 2.2.10.3 突变菌种的保存 | 第40-41页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第41-47页 |
| 2.3.1 lipo和pppA基因目的片段的扩增 | 第41-42页 |
| 2.3.2 lipo和pppA基因重组自杀质粒的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3.3 lipo和pppA基因突变菌株的筛选与鉴定 | 第43-47页 |
| 3 lipo和pppA的基因功能的初步研究 | 第47-69页 |
| 3.1 突变体菌株致病检测实验 | 第47-50页 |
| 3.1.1 菌株、水稻品种和仪器设备 | 第47页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.1.3 实验结果与分析 | 第48-50页 |
| 3.2 游动性检测实验 | 第50-52页 |
| 3.2.1 实验方法 | 第50-51页 |
| 3.2.2 实验结果与分析 | 第51-52页 |
| 3.3 胞外纤维素酶活性检测实验 | 第52-53页 |
| 3.3.1 实验方法 | 第52页 |
| 3.3.2 实验结果与分析 | 第52-53页 |
| 3.4 生物膜生成量的测定 | 第53-55页 |
| 3.4.1 实验方法 | 第53-54页 |
| 3.4.2 实验结果与分析 | 第54-55页 |
| 3.5 Lipo和Hcp蛋白的细菌双杂交互作研究 | 第55-69页 |
| 3.5.1 菌株与质粒 | 第55-56页 |
| 3.5.2 引物设计 | 第56页 |
| 3.5.3 实验方法 | 第56-62页 |
| 3.5.3.1 hcp和lipo基因全长的扩增 | 第56-57页 |
| 3.5.3.2 PCH363(Amp~R)和pKNT25(Kan~R)质粒的提取 | 第57页 |
| 3.5.3.3 双酶切 | 第57-58页 |
| 3.5.3.4 基因全长片段与质粒载体连接 | 第58-59页 |
| 3.5.3.5 热击转化 | 第59-60页 |
| 3.5.3.6 重组质粒的筛选与鉴定 | 第60页 |
| 3.5.3.7 重组质粒的再一次热击转化 | 第60页 |
| 3.5.3.8 重组质粒筛选与鉴定 | 第60-61页 |
| 3.5.3.9 构建好的重组载体显色验证蛋白互作 | 第61-62页 |
| 3.5.3.9.1 实验准备 | 第61页 |
| 3.5.3.9.2 实验方法 | 第61-62页 |
| 3.5.4 实验结果与分析 | 第62-67页 |
| 3.5.4.1 lipo和hcp基因全长扩增 | 第62-63页 |
| 3.5.4.2 第一次热击转化结果的验证 | 第63-64页 |
| 3.5.4.3 第二次热击转化结果的验证 | 第64-67页 |
| 3.5.4.4 显示验证细菌双杂交 | 第67页 |
| 3.5.5 讨论 | 第67-69页 |
| 4 壳聚糖对水稻细菌性褐条病的抑菌机理研究 | 第69-88页 |
| 4.1 试验材料准备 | 第69-70页 |
| 4.1.1 壳聚糖母液配制 | 第69页 |
| 4.1.2 培养基 | 第69页 |
| 4.1.3 菌株的活化与培养 | 第69-70页 |
| 4.2 试验方法 | 第70-76页 |
| 4.2.1 离体条件下抑菌活性的测试 | 第70-71页 |
| 4.2.2 壳聚糖抑菌机理研究 | 第71-76页 |
| 4.2.2.1 细胞膜完整性的测定 | 第71页 |
| 4.2.2.2 生物膜生成量的测定 | 第71-72页 |
| 4.2.2.3 透射电镜(TEM)观察 | 第72-73页 |
| 4.2.2.4 分泌系统相关基因的表达测定 | 第73-76页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第76-86页 |
| 4.3.1 离体条件下的壳聚糖抑菌活性 | 第76-79页 |
| 4.3.2 壳聚糖抗菌机制的研究 | 第79-86页 |
| 4.3.2.1 细胞膜完整性的测定 | 第79-81页 |
| 4.3.2.2 生物膜生成量的影响 | 第81-83页 |
| 4.3.2.3 电镜观察(TEM) | 第83-84页 |
| 4.3.2.4 分泌系统相关基因的表达 | 第84-86页 |
| 4.4 实验结论和讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 作者简介 | 第97-98页 |
