| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 胸膜肺炎放线杆菌(APP)概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 胸膜肺炎放线杆菌及其危害 | 第11页 |
| 1.1.2 胸膜肺炎放线杆菌致病机理概述 | 第11-12页 |
| 1.2 细菌应激激素受体的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 应激激素对细菌毒力的调控研究 | 第12-13页 |
| 1.2.2 细菌激素受体研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3 细菌双组份系统概述 | 第15-23页 |
| 1.3.1 细菌双组份系统功能的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.3.2 细菌双组份系统的研究方法概述 | 第21-22页 |
| 1.3.3 胸膜肺炎放线杆菌双组份系统的研究现状 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-38页 |
| 2.1 菌株、质粒及引物 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 寡核苷酸引物 | 第24-25页 |
| 2.2 主要试剂 | 第25-30页 |
| 2.2.1 实验室常用试剂 | 第25-28页 |
| 2.2.2 蛋白磷酸化相关试剂 | 第28页 |
| 2.2.3 细菌双杂交筛选所需培养基、缓冲液配制 | 第28-30页 |
| 2.3 重组质粒的构建 | 第30-33页 |
| 2.3.1 PCR及其产物的回收 | 第30-31页 |
| 2.3.2 质粒的小量抽提 | 第31-32页 |
| 2.3.3 质粒及DNA片段的酶切及酶切产物的回收 | 第32页 |
| 2.3.4 外源DNA与酶切载体的连接 | 第32页 |
| 2.3.5 大肠杆菌DH5α/BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.6 连接产物的转化 | 第33页 |
| 2.3.7 重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| 2.4 蛋白的表达和纯化 | 第33-35页 |
| 2.4.1 重组质粒转化大肠杆菌表达宿主 | 第33页 |
| 2.4.2 聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第33-34页 |
| 2.4.3 重组蛋白在大肠杆菌中的试表达 | 第34页 |
| 2.4.4 重组蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.5 蛋白质浓度测定 | 第35页 |
| 2.6 Western Blot | 第35-36页 |
| 2.7 组氨酸激酶感受应激激素的验证 | 第36页 |
| 2.8 组氨酸激酶胞质结构域蛋白的本底自磷酸化的检测 | 第36页 |
| 2.9 组氨酸激酶胞质区域蛋白与响应调控蛋白之间磷酸化的检测 | 第36页 |
| 2.10 细菌双杂交技术 | 第36-38页 |
| 3 结果及分析 | 第38-53页 |
| 3.1 APP双组份系统蛋白基因生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 3.2 重组质粒的构建 | 第39-43页 |
| 3.2.1 APP组氨酸激酶全长蛋白原核表达重组载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2 APP组氨酸激酶胞质结构域蛋白原核表达重组载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.3 APP响应调控蛋白原核表达重组载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.4 细菌双杂交相关重组载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.3 蛋白的表达和纯化 | 第43-46页 |
| 3.3.1 APP组氨酸激酶YgiY全长蛋白的表达及纯化 | 第43-45页 |
| 3.3.2 APP组氨酸激酶胞质结构域蛋白的表达及纯化 | 第45页 |
| 3.3.3 APP响应调控蛋白的表达及纯化 | 第45-46页 |
| 3.4 胸膜肺炎放线杆菌应激激素受体的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.5 胸膜肺炎放线杆菌双组份系统相互调控网络研究 | 第47-53页 |
| 3.5.1 APP双组份系统之间的磷酸化 | 第47-50页 |
| 3.5.2 APP双组份系统之间的蛋白质相互作用 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 双组份系统对应激激素的感受 | 第53页 |
| 4.2 双组份系统交叉调控网络 | 第53-55页 |
| 4.3 展望 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
