| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 海洋放线菌及其天然活性物质 | 第13-15页 |
| 1.1.1 海洋放线菌来源的抗肿瘤活性物质 | 第13-14页 |
| 1.1.2 海洋放线菌来源的抗菌活性物质 | 第14-15页 |
| 1.1.3 海洋放线菌来源的其它活性物质 | 第15页 |
| 1.2 基因组挖掘(Genome mining) | 第15-20页 |
| 1.2.1 基因组挖掘的方法 | 第15-19页 |
| 1.2.2 基因组挖掘新多肽类化合物 | 第19页 |
| 1.2.3 基因组挖掘新聚酮类化合物 | 第19-20页 |
| 1.3 链霉菌抗生素的生物合成调控 | 第20-24页 |
| 1.3.1 全局性调控 | 第20-22页 |
| 1.3.2 途径特异性调控 | 第22-23页 |
| 1.3.3 组分系统调控(Two-component system,TCS) | 第23-24页 |
| 1.4 羊毛硫抗生素及其生物合成基因簇 | 第24-28页 |
| 1.4.1 羊毛硫抗生素 | 第24-25页 |
| 1.4.2 羊毛硫抗生素的分类 | 第25-26页 |
| 1.4.3 羊毛硫抗生素的基因簇 | 第26-27页 |
| 1.4.4 羊毛硫抗生素的应用前景 | 第27-28页 |
| 1.5 糖肽类抗生素及其生物合成基因簇 | 第28-30页 |
| 1.5.1 糖肽类抗生素 | 第28-29页 |
| 1.5.2 糖肽类抗生素的抗菌机制 | 第29页 |
| 1.5.3 糖肽类抗生素的基因簇 | 第29-30页 |
| 1.5.4 新型糖肽类抗生素 | 第30页 |
| 1.6 硫磺链霉菌L180和星海链霉菌S187 | 第30-32页 |
| 1.7 本课题的研究内容及意义 | 第32-33页 |
| 2 硫磺链霉菌L180抗菌活性物质的基因组挖掘 | 第33-51页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料及设备 | 第33-35页 |
| 2.2.1 实验菌种与质粒 | 第33页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-40页 |
| 2.3.1 硫磺链霉菌L180羊毛硫抗生素基因簇的发现 | 第35页 |
| 2.3.2 硫磺链霉菌L180基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.3 目的基因的PCR扩增 | 第36页 |
| 2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的热激转化 | 第37页 |
| 2.3.6 硫磺链霉菌L180原生质体的制备 | 第37-38页 |
| 2.3.7 硫磺链霉菌L180原生质体的转化 | 第38页 |
| 2.3.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.9 菌株的发酵培养 | 第39页 |
| 2.3.10 对多种致病菌的抗菌活性测试 | 第39页 |
| 2.3.11 发酵液稳定性测试 | 第39-40页 |
| 2.3.12 抗菌活性物质的初步纯化 | 第40页 |
| 2.3.13 粗提物的HPLC分析 | 第40页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第40-49页 |
| 2.4.1 硫磺链霉菌羊毛硫抗生素基因簇 | 第40-44页 |
| 2.4.2 硫磺链霉菌L180基因组DNA提取结果 | 第44页 |
| 2.4.3 目的基因sidR PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| 2.4.4 克隆载体的测序 | 第45页 |
| 2.4.5 重组载体pWHM3-sidR-E.coli DH5α的鉴定 | 第45页 |
| 2.4.6 重组载体pWHM3-sidR转化S.sulphureus L180 | 第45-46页 |
| 2.4.7 抗菌活性测试结果 | 第46页 |
| 2.4.8 发酵液稳定性测试结果 | 第46-48页 |
| 2.4.9 粗提物的HPLC分析结果 | 第48-49页 |
| 2.4.10 纯化组分的HRMS(高分辨质谱)分析结果 | 第49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-51页 |
| 3 星海链霉菌S187抗补体活性物质的基因组挖掘 | 第51-70页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料及设备 | 第51-53页 |
| 3.2.1 实验菌种与质粒 | 第51页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第52-53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 3.3.1 星海链霉菌S187非核糖体多肽化合物生物合成基因簇的发现 | 第53页 |
| 3.3.2 星海链霉菌S187基因组DNA的提取 | 第53页 |
| 3.3.3 目的基因sinR的PCR扩增 | 第53页 |
| 3.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及热激转化 | 第53页 |
| 3.3.5 星海链霉菌S187原生质体的制备及转化 | 第53页 |
| 3.3.6 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.7 菌株的发酵培养 | 第54页 |
| 3.3.8 发酵液抗补体活性测试 | 第54-55页 |
| 3.3.9 抗补体活性物质的分离纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.10 纯化组分的抗补体活性测试 | 第56页 |
| 3.3.11 纯化组分的HPLC分析 | 第56页 |
| 3.3.12 纯化组分的液质联用检测 | 第56-57页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第57-68页 |
| 3.4.1 星海链霉菌S187非核糖体多肽化合物基因簇及调节基因sinR | 第57-58页 |
| 3.4.2 星海链霉菌S187基因组DNA提取结果 | 第58-59页 |
| 3.4.3 目的基因sinR PCR扩增结果 | 第59页 |
| 3.4.4 克隆载体的测序 | 第59页 |
| 3.4.5 重组载体pWHM3-sinR-E.coli DH5a的鉴定 | 第59-60页 |
| 3.4.6 重组载体pWHM3-sinR转化S.xinghaiensis 187 | 第60-61页 |
| 3.4.7 发酵液抗补体活性测试结果 | 第61-62页 |
| 3.4.8 抗补体活性物质的初步纯化结果 | 第62页 |
| 3.4.9 纯化组分的抗补体活性测试结果 | 第62-64页 |
| 3.4.10 纯化组分的HPLC分析结果 | 第64-68页 |
| 3.4.11 质谱分析结果 | 第68页 |
| 3.5 本章小结 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 展望 | 第71-72页 |
| 创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录A 基因原始序列 | 第80-82页 |
| 附录B 基因序列测序结果 | 第82-84页 |
| 附录C 引物序列 | 第84-85页 |
| 附录D 质粒谱图 | 第85-87页 |
| 附录E 星海链霉菌活性样品液质联用图 | 第87-90页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
