| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 兔出血热病毒RHDV | 第12-15页 |
| 1.1.1 兔出血热病毒RHDV的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 兔出血热病毒RHDV的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.3 兔出血热病毒RHDV结构特征 | 第13-14页 |
| 1.1.4 兔出血热病毒RHDV研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2 细胞死亡 | 第15-16页 |
| 1.3 PEGFP真核表达系统 | 第16-17页 |
| 1.3.1 pEGFP真核表达系统介绍 | 第16页 |
| 1.3.2 pEGFP-N1相关信息及克隆、表达流程 | 第16-17页 |
| 1.4 PET原核表达系统 | 第17-18页 |
| 1.4.1 pET表达系统简介 | 第17页 |
| 1.4.2 pET-49b相关信息及克隆、表达流程 | 第17-18页 |
| 1.5 细胞凋亡检测 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第20-28页 |
| 2.1 实验仪器及其相关设备 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.2.1 细胞,菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.2.2 实验相关试剂 | 第20-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.3.1 提取质粒DNA | 第22页 |
| 2.3.2 PCR扩增反应 | 第22-23页 |
| 2.3.3 制备感受态细胞及转化 | 第23-24页 |
| 2.3.4 蛋白的诱导表达检测 | 第24页 |
| 2.3.5 western blot检测 | 第24页 |
| 2.3.6 蛋白的分离纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.7 细胞转染 | 第25页 |
| 2.3.8 真核细胞DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.9 caspase活性检测(试剂盒) | 第26页 |
| 2.3.10 Annexin-APC、PI双染流式细胞仪检测(试剂盒) | 第26页 |
| 2.3.11 MTT assay(试剂盒) | 第26-27页 |
| 2.3.12 细胞周期检测(试剂盒) | 第27页 |
| 2.3.13 免疫荧光 | 第27-28页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第28-49页 |
| 3.1 P16原核表达质粒的构建及鉴定 | 第28-29页 |
| 3.1.1 p16基因的PCR扩增 | 第28页 |
| 3.1.2 p16重组载体的双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2 P16蛋白的诱导表达及纯化 | 第29-33页 |
| 3.2.1 p16蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 3.2.2 Western-blot验证诱导表达的p16蛋白 | 第30页 |
| 3.2.3 p16蛋白的纯化 | 第30-32页 |
| 3.2.4 western blot验证纯化的p16蛋白 | 第32页 |
| 3.2.5 免疫荧光验证p16抗体 | 第32-33页 |
| 3.3 P16-PEGFP-N1真核表达载体的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.1 p16基因片段的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3.3.2 p16重组载体的双酶切鉴定 | 第34页 |
| 3.4 P16蛋白在RK13细胞中的定位 | 第34-36页 |
| 3.5 细胞凋亡检测 | 第36-42页 |
| 3.5.1 DNA ladder凝胶电泳 | 第36页 |
| 3.5.2 caspase-3、8/10、9活性测定 | 第36-38页 |
| 3.5.3 流式细胞仪检测 | 第38-39页 |
| 3.5.4 MTT assay | 第39页 |
| 3.5.5 细胞周期检测 | 第39-42页 |
| 3.6 P16蛋白在HELA细胞中表达 | 第42-43页 |
| 3.6.1 台盼蓝染色 | 第42页 |
| 3.6.2 caspase-3活性检测 | 第42-43页 |
| 3.7 P23原核载体的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| 3.7.1 p23基因的PCR扩增 | 第43页 |
| 3.7.2 p23-pET-49b重组载体的双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.7.3 p23-pMal-c2x重组载体 | 第44页 |
| 3.8 P23蛋白的诱导表达 | 第44-46页 |
| 3.9 WESTERN BLOT检测 | 第46页 |
| 3.10 P23真核表达载体的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.10.1 p23基因片段的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 3.10.2 p23重组载体的双酶切鉴定 | 第47页 |
| 3.11 p23蛋白在RK13细胞中的定位 | 第47-49页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第49-51页 |
| 4.1 讨论 | 第49-50页 |
| 4.2 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 发表的论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
